[发明专利]一种位点特异整合性慢病毒载体系统及其制备方法

权利要求书

1.一种位点特异整合性慢病毒载体系统，其特征在于，该载体系统由FattbC31UGW质粒、CMVΔ8.9-D64N/D116N和包膜质粒VSVG组成；FattbC31UGW质粒是将attB位点序列和位点特异整合酶C31基因序列依次连接并且克隆到FUGW载体的pacI酶切点而得；CMVΔ8.9-D64N/D116N质粒是由CMVΔ8.9质粒中的pol基因D64N和D116N突变而得。

2.如权利要求1所述慢病毒载体系统的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：

(1)获得Attb-C31编码序列；

(2)将(1)获得的序列克隆至FUGW载体pacI酶切位点获得质粒FattbC31UGW；

(3)以质粒CMVΔ8.9为模版，将pol基因中的D64N和D116N突变后得到CMVΔ8.9-D64N/D116N；

(4)将FattbC31UGW质粒、包膜质粒VSVG和包装结构质粒CMVΔ8.9-D64N/D116N质粒混合，混合比例为1.5-10∶1-5∶1；即形成如权利要求1所述慢病毒载体系统。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，该制备方法中(1)用PCR方法或者人工合成方法得到Attb-C31整合酶编码序列。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，该制备方法中(1)中，首先将attb序列插入CMV-c31质粒获得重组CMV-Attb-C31质粒，然后用PCR方法或者人工合成方法得到Attb-C31整合酶编码序列。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，该制备方法(3)用定向突变方法，获得了HIV整合酶突变的表达载体CMVΔ8.9-D64N/D116N。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，(4)中采用混合比例为5∶4∶3或者4∶3∶2。

7.一种位点特异性整合试剂盒，其特征在于，该载体试剂盒中含有权利要求1所述的慢病毒包装载体系统。