[发明专利]一个能辨别海带雌配子体的SCAR分子标记

权利要求书

1、一种能辨别海带雌配子体的SCAR分子标记，其特征在于为F-494，其序列为SEQ IDNO.4。

2、一种用于海带雌配子体基因组DNA扩增引物对，其特征在于该引物对的序列为SEQID NO.3。

3、一种能辨别海带雌配子体的SCAR分子标记的提取方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)在17±1℃、30-40μmol m^-2s^-1光照条件下培养海带雌、雄性配子体无性繁殖系，收集材料并提取配子体基因组DNA；

(2)根据地钱Y染色体保守区域碱基序列设计引物SEQ ID NO.1，利用此引物分别对海带雌、雄配子体基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物用1.0％的琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，凝胶成像系统进行观察和拍照；

(3)回收特异扩增片段的DNA，利用pMD19-T载体、大肠杆菌感受态菌株JM109，进行克隆，挑选白色菌落，使用PCR确认载体中插入片段的长度大小，将含有目的片段的菌液进行测序，得SEQ IDNO.2；

(4)根据测序结果，将原正向引物向3’端及反向引物向5’端延长至29个碱基，获得SCAR特异引物的序列SEQ ID NO.3，对海带雌、雄配子体基因组DNA进行PCR扩增，扩增结果在1.5％的琼脂糖凝胶上进行电泳，凝胶成像系统进行观察与拍照；

(5)按照步骤(3)进行DNA胶回收、连接转化、白色菌落筛选、插入片段的长度大小确认等，最后对含有目的片段的菌液进行测序，获得一个能鉴别海带雌配子体的SCAR分子标记，它的DNA序列为SEQ ID NO.4。