[发明专利]一种用于海洋灰绿曲霉生产新型抗肿瘤活性化合物的新型培养基及其制备方法

权利要求书

1. 一种用于海洋灰绿曲霉生产新型抗肿瘤活性化合物的新型培养基，其特征在于，每升所述新型培养基包括：可溶性淀粉20～100g，蔗糖10～100g，麦芽糖20～100g，蛋白胨0.5-6g，酵母膏0.3-6g，黄豆粉0.2-4g，谷氨酸钠0.5-10g，七水硫酸镁0.01-1g，磷酸二氢钾0.01-2g，其余为人工海水。

2. 根据权利要求1所述的新型培养基，其特征在于，所述可溶性淀粉40g，蔗糖40g，麦芽糖30g，蛋白胨2g，酵母膏1.07g，黄豆粉1g，谷氨酸钠2g，七水硫酸镁0.03g，磷酸二氢钾0.05g。

3. 根据权利要求1所述的新型培养基，其特征在于，每升所述人工海水包括：氯化钠24.5g，无水硫酸钠3.92g，无水氯化钙0.91g，六水氯化镁4.98g，硼酸0.026g，氯化钾0.664g，溴化钾0.096g，碳酸氢钠0.192g，其余为去离子水。

4. 一种用于制备根据权利要求1所述的新型培养基的方法，其特征在于，包括步骤：

a.所述可溶性淀粉用部分所述人工海水进行糊化，冷却；

b.所述蔗糖，所述麦芽糖，所述蛋白胨，所述酵母膏，所述黄豆粉，所述谷氨酸钠，

所述七水硫酸镁和所述磷酸二氢钾溶于部分所述人工海水；

c.将上述两步骤得到的溶液混合均匀，用所述人工海水定容。

5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤a中，所述糊化为用部分所述人工海水将所述可溶性淀粉制成悬浊液，然后缓慢倒入90-100℃的人工海水中并不断搅拌，至成半透明状液体。

6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤c进一步包括：在121℃，灭菌20～40min。

7. 一种使用根据权利要求1所述的新型培养基培养海洋灰绿曲霉HB1-19生产灰绿霉素A的发酵方法，其特征在于，包括步骤：取海洋灰绿曲霉HB1-19孢子接种所述新型培养基进行培养，获得新鲜接种液，取所述新鲜接种液按10～15％的接种量接入新鲜的所述新型培养基进行发酵培养6-9天，获得发酵液。

8. 根据权利要求7所述的发酵方法，其特征在于，按终浓度约1～10*10⁷个所述海洋灰绿曲霉HB1-19孢子/ml进行接种；所述培养是在28℃，170r/min摇床培养30～60h。

9. 一种根据权利要求7所述的发酵方法生产的灰绿霉素A的检测方法，其特征在于，包括步骤：待所述发酵液pH变至7.0左右或所述发酵液变紫黑色后约30h，停止培养；取适量所述发酵液，加入乙酸乙酯和玻璃珠进行萃取，离心，取适量有机相进行旋转蒸馏；馏干物用无水甲醇溶解，离心；取适量上层液，用无水甲醇稀释若干倍后，用HPLC测定灰绿霉素A含量，进而换算成所述发酵液中灰绿霉素含量。

10. 根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述发酵液取10ml，所述乙酸乙酯20ml，所述玻璃珠20粒；所述萃取在20℃和200r/min条件下进行。