[发明专利]钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子、其克隆方法及其应用

权利要求书

1.一种钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子，其特征在于该基因具有下列核苷酸序列之一：

(1).具有SEQ NO 1所示的DNA序列；

(2).与序列表中序列1限定的核酸序列具有95％以上的同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

2.一种根据权利要求1所述的钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子的克隆方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.根据NCBI GenBank上DvSPT2的cDNA序列，即DQ286761，设计引物，引物的序列如下：

5′-AGAACCTGAGCGGCTTCATC-3′

5′-CACGCAGCAATGAAGGAGGT-3′

通过四维PCR筛选体系从盐藻基因组BAC文库得到一个含有盐藻钠磷共转运通道2号基因DvSPT2的BAC克隆，并构建该BAC克隆的鸟枪文库；

b.大通量提取鸟枪文库的质粒DNA，在MegaBACE 4500上进行序列的测定，每个鸟枪质粒利用M13正反向引物，进行双向测序；

c.在RedHat Linux平台的并联计算机群中，使用Phred/Phrap/Consed程序拼接所测序列，得到若干长短不一的重叠群Contig；使用PCR方法填补测序“沟”，使用细菌转座子Kit填补物理“沟”，最后拼接得到一段连续的全长为64776bp的盐藻基因组序列，DvSPT2基因组序列的启动子和上游调控序列也一并获得，以开放读码框第一位碱基为基准，向5′上游方向划定1500bp，即为钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子。

3.一种根据权利要求1所述的钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子在盐胁迫以及磷缺乏条件下的基因调控中的应用。