[发明专利]高灵敏免疫定量胶乳测定试剂的制备方法

权利要求书

1.一种高灵敏免疫定量胶乳测定试剂的制备方法，其特征是： 

高灵敏免疫定量胶乳测定试剂的组成： 

R₂：微球粒浓度按重量百分比计0.2～0.4％，0.12M甘氨酸缓冲液pH7.2，乙二醇按体积百分比计30％，2mM EDTA·2Na乙二胺四乙酸二钠盐，0.1％NaN₃

其制备经过下列步骤制备： 

(1)载体免疫定量胶乳微颗粒的制备纯水，经加热至沸腾后除去水中绝大部分氧气，经冷却后取750ml加入1.0g十二烷基磺酸钠SDS在65℃恒温10分钟，待SDS呈悬浮溶液状态后加入含量大于98％的苯乙烯单体30ml，再将温度上调至75℃，平衡15分钟后加入丙烯酸5.2ml，pH调节至5.5-6.5，平衡后加入过硫酸钾，开始计时并逐渐升温至84℃，反应时间为30分钟，按微颗粒球大小表面羧基量的4倍分二次加入已中和的丙烯酸使微球表面全羧化为止，在84℃老化两小时，自然冷却； 

(2)抗体、抗原的制备：由市购采得，按重量体积百分比计33％硫酸铵饱和沉淀纯化抗体； 

(3)常温下在前述微颗粒球液中按1％浓度含有效羧基量为0.005mM计加入水溶碳化二亚胺EDC，0.005*192*40％mg量，在pH＜6.5条件下活化20分钟，将pH上调至7.0-7.2，加入正氨基己酸0.005*132*60％mg量，在室温下作用2小时将pH上调至7.5，在4℃过夜，次日对0.025M，pH7.0的NaCl溶液透析两次，备用； 

(4)将已伸手臂的微球液按0.005*192*15％mg量加入EDC，活化20分钟后，加入50％体积的乙二醇，并将pH上调至7.0-7.2，平衡后快速倒入抗体液，在室温下作用2小时，同时控制pH不低于7.0，置于4℃平衡过夜；次日，将 pH调至7.0，再置于4℃平衡过夜；48小时后，按2.0mg/1％·ml的比例加入牛血清白蛋白，所述牛清白蛋白溶于0.025M，NaCl，pH6.8，封闭过夜，最后补加甘氨酸，乙二醇，NaCl，使其最终浓度达到0.12M，30％，0.1％，pH7.4；在4℃中储存3日后待用；

(5)完成制备。