[发明专利]倍半萜香豆素醚的提取纯化方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种化工技术领域的方法，更具体地，涉及一种倍半萜香豆素醚的提取纯化方法及其应用。

背景技术

青蒿为我国著名的传统中草药，具有清热，解暑，除蒸；治温病，暑热，骨蒸劳热，疟疾，痢疾，黄疸，疥疮，瘙痒。青蒿根能治疗热骨蒸、关节酸痛、大便下血；果实(青蒿子)能清热泪盈眶明目，杀虫。其产生的抗疟倍半萜青蒿素被世界卫生组织认定为21世纪替代奎宁的最有效的抗菌素疟疾药。二次开发青蒿资源，产生新的具有生物活性的物质，是进一步利用中草药，实现中药现代化的有利手段。利用发根快速生产的特征，大规模生产植物次级代谢物一直是植物细胞工程的常用技术；利用发根积累次级代谢产物的特点还可以用来发现植物本身低含量的次级代谢产物，从而完善植物的代谢谱，并且可以发现新的生物活性物质，并以此为模型研究植物的次级代谢调控规律，具有重要的生产潜力和学术价值。

倍半萜香豆素醚(Drimartol A)为白色针状晶体，在薄层硅胶板GF254上紫外下显兰色荧光。

经过对现有技术的检索发现，在期刊Journal of Natural Products第45卷第四期，New sesquiterpene-courmain from Achillea and Artemisiaspecies一文中，报道了从西北蒿，伊朗蒿，老人蒿，蓍草和毛连蒿中分离到倍半萜香豆素醚的例子，但是在该文献中的方法采用石油醚冷浸提取的方法，此方法分离时间长，分离效率低，消耗溶剂多。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术的不足，提供一种倍半萜香豆素醚的提取纯化方法及其应用。该制备方法简单、制备原料易得；同时由于该化合物具有明显的抗肿瘤活性，因此可以应用于化学预防和治疗肿瘤和开发相关抗肿瘤药物。

本发明是通过以下技术方案实现的：本发明所涉及的倍半萜香豆素醚的提取纯化方法包括以下步骤：

第一步、提取：将青蒿发根粉碎，用5到10倍体积量的甲醇作为溶剂进行超声提取，超声2到5次，将提取液旋转蒸发，浓缩得到浸膏，通过乙酸乙酯和水双相分散，萃取分层，取上层乙酸乙酯有机相，浓缩至原体积的1/20时，用于下一步的柱层析；

所述超声提取，每次持续时间为30分钟。

第二步、分离：在上述的萃取浓缩液中加入吸附剂，成固体粉末状，然后上硅胶柱进行柱层析，用石油醚和乙酸乙酯混合洗脱液进行洗脱，然后进行薄层层析检测，收集含所述倍半萜香豆素醚的组分，浓缩得到倍半萜香豆素醚的浓缩液；

所述吸附剂为100到200目的硅胶。

所述硅胶柱为100到200目，且规格为4040×800mm的硅胶柱。

所述石油醚和乙酸乙酯的混合洗脱液是指石油醚与乙酸乙酯的体积比为1比3的混合溶液。

第三步、纯化：将第二步中得到的浓缩液进一步浓缩成浸膏后，用等体积甲醇分散，以尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩对应组分。

所述尼龙膜是指孔径为0.45um的尼龙膜。

所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇体积比例为78％，水的体积比例为22％的混合溶液。

采用本发明方法得到的倍半萜香豆素醚，可以应用于肿瘤的预防和治疗。所述肿瘤为肺癌、卵巢癌、肝癌、子宫颈癌、高转移肺癌和胰腺癌中的一种或几种。

本发明首次从青蒿发根中分离得到倍半萜香豆素醚，制备方法简便、原料易得，采用甲醇超声萃取，进一步可用柱层析纯化结晶，还可用制备液相直接分离纯化出高纯度的晶体，为大规模工业自动化生产提供了可能。大大节省了分离时间，提高了分离效率。由此，本发明也用于可开发上述含有倍半萜香豆素醚的植物资源。

本发明还首次发现倍半萜香豆素醚具有明显的抗肿瘤活性，通过流式细胞仪分析了倍半萜香豆素醚对肿瘤细胞周期的影响，在此基础上提供了其在肿瘤预防治疗中的实际应用，对于开发相关抗肿瘤药物以及青蒿资源的二次开发均具有重要意义。

附图说明

图1倍半萜香豆素醚对六个肿瘤细胞株的生长抑制示意图。

图2倍半萜香豆素醚对H08910细胞形态学的影响图；

其中：A为DMSO对照组的正常细胞形态；B为倍半萜香豆素醚组诱导H08910细胞凋亡形态图。

图3倍半萜香豆素醚的制备液相色谱图。

具体实施方式