[发明专利]一种高纯度丹酚酸B的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(a)配制pH7的磷酸氢二钠/磷酸二氢钠缓冲液，将以干品计10⁹-10¹⁰个 /ml禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞和已经除去多糖的20-70g 的丹参水提物加入到缓冲液中，通气搅拌，转化，HPLC检测，待迷迭香酸恰好 被水解完毕后，离心或过滤除去菌体，中止转化，得到去除迷迭香酸的丹参水 提物；

(b)将去除迷迭香酸的丹参水提物调节pH 1-3，静置，过滤除去不溶性沉 淀；

(c)将步骤(b)得到的滤液调节pH 14，上反相树脂柱，流速，1倍柱 体积/小时；

(d)5倍柱体积的蒸馏水洗脱树脂柱，流速，3倍柱体积/小时，除去无机 盐和极性色素；

(e)45％的甲醇洗脱树脂柱，流速，2倍柱体积/小时，分步收集，HPLC检 测，待保留时间小于丹酚酸B的杂质洗脱完毕后停止洗脱；

(f)55％甲醇洗脱丹酚酸B，流速，2倍柱体积/小时，HPLC检测，待丹酚 酸B洗脱完毕时中止洗脱；

(g)将丹酚酸B浓缩，调节pH2后乙酸乙酯萃取除盐，回收乙酸乙酯后以水溶解丹 酚酸B，冷冻干燥，得到丹酚酸B纯度大于97％的样品。

2.一种高纯度丹酚酸B的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(i)配制pH7的磷酸氢二钠/磷酸二氢钠缓冲液，将以干品计10⁹-10¹⁰个 /ml禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞和已经除去多糖的20-70g 的丹参水提物加入到缓冲液中，通气搅拌，转化，HPLC检测，待迷迭香酸恰好 被水解完毕后，离心或过滤除去菌体，中止转化，得到去除迷迭香酸的丹参水 提物；

(ii)将去除迷迭香酸的丹参水提物调节pH 1-3，静置，过滤除去不溶性 沉淀；

(iii)将步骤(ii)得到的滤液调节pH 6-9，使丹酚酸B成为钠盐，上 反相树脂柱，流速5倍柱体积/小时；上柱后以去离子水洗脱树脂柱，流速5 倍柱体积/小时，分步收集，HPLC检测，合并纯度达标的丹酚酸B钠盐样品；

(iv)浓缩，调节pH 2后乙酸乙酯萃取除盐，回收乙酸乙酯后以水溶解丹酚 酸B，冷冻干燥，得到纯度超过99％的丹酚酸B样品。

3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，对于纯度未达标的丹酚 酸B洗脱液，收集后重复上述步骤进行分离。。

4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，将以干品计40-50g的 丹参水提物和5×10⁹-10¹⁰个/ml禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞混 合。

5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的禾谷镰孢菌 (Fusarium graminearum)静息细胞是处于对数生长期后期的静息细胞。

6.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的丹参水提物以干 品为基准，其中的丹酚酸B含量为10-60w/w％。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的丹参水提物以干品为 基准，其中的丹酚酸B含量为20-60w/w％。

8.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)或(ii) 中，pH为2。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(c)中，pH为3。

10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(c)中，所述的反 相树脂是以聚苯乙烯为基质的树脂。

11.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(iii)中，pH为7。