[发明专利]一种高纯度丹酚酸B的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物纯化领域，尤其涉及一种从丹参中提取高纯度丹酚酸B的 方法。

背景技术

已有的丹酚酸B的分离纯化方法主要是通过大孔吸附树脂分离或者高速逆 流色谱分离。

大孔吸附树脂分离的主要缺点是制备得到的丹酚酸B样品纯度较低。 CN1247855A公开了丹参多酚酸镁盐的制备方法，其主要有效成分为丹酚酸B镁 盐，但是其含量只能达到60％。CN1240695C公开的丹酚酸B的提取工艺，采用 硅胶柱层析分离纯化丹酚酸B，得到的纯度50％-96％的丹酚酸B，但是过程复杂， 并且采用硅胶柱层析成本较高，操作过程烦琐，难以扩大到生产。Xiao Wang 等在J.Sep.Sci.30(2007)，3214-3217描述了采用高速逆流色谱法分离纯化丹 酚酸B的工艺，显示pH梯度逆流色谱可以将丹酚酸B纯化到94.1％，并可能应 用于大批量生产。但是其工艺复杂，并且成本高。CN1876641A中将丹参采用微 波处理，离心去除沉淀后上聚酰胺树脂，采用乙醇梯度洗脱，得到纯度达到95％ 的丹酚酸B，所述丹酚酸B的纯度不是太高，同时文中也没有提及其收率。

因此，本领域迫切需要提供一种制备高纯度丹酚酸B的方法，该方法应当 工艺简单、成本低，而且收率高。

发明内容

本发明旨在提供一种高纯度丹酚酸B的制备方法。

在本发明中，提供了一种高纯度丹酚酸B的制备方法，所述的方法包括步骤：

(1)将丹参水提物和禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞接触，在 20-35℃生物转化24-90小时，得到去除迷迭香酸的丹参水提物；和

(2)去除迷迭香酸的丹参水提物经反相树脂吸附，通过水或甲醇水溶液洗脱 得到高纯度的丹酚酸B，所述的丹酚酸B的纯度≥97w/w％。

在另一优选例中，所述的丹酚酸B的纯度≥99w/w％。

在另一优选例中，将以干品计20-70g的丹参水提物和10⁹-10¹⁰个/ml禾谷 镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞混合。

在另一优选例中，将以干品计40-50g的丹参水提物和5×10⁹-10¹⁰个/ml禾 谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞混合。

在另一优选例中，所述的禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞是处 于对数生长期后期的静息细胞。

在另一优选例中，所述的丹参水提物以干品为基准，其中的丹酚酸B含量为 10-60w/w％。

在另一优选例中，所述的丹参水提物以干品为基准，其中的丹酚酸B含量为 20-60w/w％。

在另一优选例中，在步骤(1)的放置过程中通入空气并搅拌或振荡。

在另一优选例中，步骤(1)中，在22-32℃放置30-80小时。

在另一优选例中，步骤(2)中，所述的反相树脂是以聚苯乙烯为基质的 树脂。

在另一优选例中，步骤(2)中，将步骤(1)得到的转化液调节pH1-3， 经反相树脂吸附，通过甲醇水溶液洗脱得到高纯度的丹酚酸B；或将步骤(1) 得到的转化液调节pH6-9，经反相树脂吸附，通过水洗脱得到高纯度的丹酚酸 B。

在另一优选例中，通过甲醇水溶液梯度洗脱得到高纯度的丹酚酸B，所述 的甲醇水溶液中的甲醇含量为35-70v/v％。

在另一优选例中，所述的甲醇水溶液中的甲醇含量为40-60v/v％。

在另一优选例中，所述的方法包括步骤：

(a)将丹参水提物和禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)静息细胞混合， 在20-35℃通入空气，搅拌或振荡24-90小时，得到去除迷迭香酸的丹参水提物；

(b)将去除迷迭香酸的丹参水提物离心除去菌体，调节pH1-3过滤，除去沉 淀得到滤液；和

(c)滤液调节pH1-3，经反相树脂吸附，通过甲醇水溶液洗脱得到高纯度 的丹酚酸B；或滤液调节pH6-9，经反相树脂吸附，通过水洗脱得到高纯度的 丹酚酸B。

据此，本发明提供了一种制备高纯度丹酚酸B的方法，该方法工艺简单、 成本低，而且收率高。

附图说明