[发明专利]抑制端粒酶活性的融合蛋白、其制备及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和生物化学工程领域。更具体地说，本发明涉及一种融合有蛋白转导结构域的端粒酶活性抑制蛋白，及其制备方法和应用。 

背景技术

端粒酶(Telomerase)是一种合成和延伸细胞染色体端粒的核糖核蛋白，它包含两种基本成分：逆转录酶催化亚基hTERT和RNA组分hTR。端粒酶能以自身RNA为模板，反转录合成端粒重复序列，加到染色体末端，以弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失，维持端粒的长度。 

研究表明，在正常人体细胞内端粒酶活性几乎检测不到，因此，人正常体细胞分裂次数是有限的，细胞每分裂一次，端粒便丢失50-200bp，当端粒缩短到一定程度时细胞生长受到抑制，即称为细胞衰老，并走向死亡。 

然而，在绝大多数恶性肿瘤细胞(85％)中可以检测到端粒酶活性且活性较强，端粒酶对端粒的重新合成补偿了它在细胞繁殖过程中的持续丢失，从而使得细胞可以不断分裂，这是细胞永生化和癌变的一个重要机制。 

Kim等分析总结了大量研究结果，检测了100多种恶性肿瘤标本，指出端粒酶诊断肿瘤的敏感性为85％，特异性为91％，阳性预测值为91％，阴性预测值为81％，充分表明端粒酶在肿瘤诊断中的价值(Kim NW，Piatyszek MA，Prowse KR，et al.Specific association of human telomerase activity with immortalcells and cancer.Science.1994Dec 23；266(5193)：2011-5.)。Kim等认为，端粒酶被激活是发生恶性肿瘤的主要因素之一，其激活及表达程度与肿瘤的发生和转移密切相关，抑制端粒酶并使端粒缩短被认为是抑制癌细胞的一种机制，因此端粒酶成为肿瘤靶向治疗的理想靶点。 

目前，以端粒酶为靶点的肿瘤治疗研究，主要采用了针对端粒酶RNA组分的反义核酸技术(Kondo S.，Kondo Y.，Li G.，et al，Targeted therapy of humanmalignant glioma in a mouse model by 2-5A antisense directed against telomerase RNA.Oncogene，1998，16：3323 3330.Ludwig A，Saretzki G，Holm PS，et al.Ribozyme cleavage of telomerase mRNA sensitizes breast epithelial cells toinhibitors of topoisomerase.Cancer Res，2001，61：3053-3061；Feng J.，Funk W.D.，Wang S.S.，et al.The RNA component of human telomerase，Science，1995，269：12361241)、基因治疗技术、切割端粒酶mRNA的核酶技术(Ludwig A，Saretzki G，Holm PS，et al.Ribozyme cleavage of telomerase mRNA sensitizesbreast epithelial cells to inhibitors of topoisomerase.Cancer Res，2001，61：3053-3061)和抑制端粒酶基因转录活性的技术等(Meyerson，M.Counter C.M.，Eaton E.N.，et al.hEST2，the putative human telomerase catalytic subunit gene，isup-regulated in tumor cells and during immortalization，Cell，1997，90：785795；W.C.Hahn，S.A.Stewart，M.W.Brooks，S.G.York，E.Eaton，A.Kurachi，R.L.Beijersbergen，J.H.Knoll，MMeyerson，R.A.Weinberg，Inhibition of telomeraselimits the growth of human cancer cells，Nat.Med，1999，5：1641170)。这些技术可以缩短肿瘤细胞的端粒，进而使细胞进入危机期或者死亡，或者使肿瘤细胞的致瘤性显著下降。