[发明专利]4连体胸腺素α1基因序列及转基因番茄的制备方法

权利要求书

1.一种4连体胸腺素α1基因序列，其特征在于，包括：根据植物偏爱密码子设计的编码具有生物活性胸腺素α1多肽的核苷酸序列；且核苷酸序列与SEQ ID NO.2中从核苷酸第16-408位的核苷酸序列有至少75％的同源性；或者核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.2中从核苷酸第16-408位的核苷酸序列杂交。

2.根据权利要求1所述的4连体胸腺素α1基因序列，其特征是，所述的序列编码具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的多肽。

3.根据权利要求1所述的4连体胸腺素α1基因序列，其特征是，所述的DNA分子，其所构建的载体包含该DNA分子。

4.根据权利要求1所述的4连体胸腺素α1基因序列，其特征是，所述的DNA分子，其所构建的载体转化的宿主细胞是植物或真核细胞。

5、一种转基因番茄的制备方法，其特征在于，该方法包括如下的步骤：

第一步、含目的基因(4×Tα1)表达载体的构建：

将含有4×Tα1基因的克隆载体质粒进行酶切，回收目标DNA片段，获得带有相应的粘性末端的目的基因4×Tα1，然后将其克隆到植物表达载体中，通过测序或酶切鉴定，在确保表达载体中的目的基因阅读框架正确的前提下，再将表达载体质粒用冻融法转入农杆菌中，获得包含目的基因表达载体的工程菌；

第二步、植物遗传转化：

①将灭菌后的植物种子播于发苗培养基上，待子叶展开后，将子叶或下胚轴剪成小片作为外植体用于转化；

②将含有目的基因表达载体的工程菌于28℃摇菌培养至OD₆₀₀＝0.8~1.0时，室温6,000g离心5~8min；

③弃上清，菌体用液体MS培养基重悬，然后加入准备好的包括子叶和下胚轴在内的外植体浸泡8~10分钟；

④将浸染结束后的外植体取出，吸去表面残余菌液；然后将外植体置于共培养培养基上在25℃共培养36小时；

⑤共培养结束后将外植体转移到分化培养基上，在25~28℃光照下培养，3~4周可见形成抗性愈伤组织或再生芽；

⑥待再生芽长至约3-4厘米时，将其切下移植到生根培养基上进行生根培养，7~10天左右生根；

⑦根系发达后，将植株取出，用无菌水洗去附着在根系上的固体培养基，在珍珠岩中驯化并用质量体积百分比为1％的MS粉水溶液补充营养和水分，一周后移入土中。

6、根据权利要求5所述的转基因番茄的制备方法，其特征是，第二步中所述的发苗培养基的各组成成分的质量百分比为：MS粉为0.22％，蔗糖为3％，植物凝胶为0.26％，余量为蒸馏水，该发苗培养基的pH值为5.8。

7、根据权利要求5所述的转基因番茄的制备方法，其特征是，第二步中所述的液体MS培养基的各组成成分的质量百分比为：MS粉为0.44％，蔗糖为3％，余量为蒸馏水，该液体MS培养基的pH值为5.8。

8、根据权利要求5所述的转基因番茄的制备方法，其特征是，第二步中所述的共培养培养基的各组成成分的质量百分比为：MS粉为0.44％，蔗糖为3％，植物凝胶为0.26％，6-苄氨基嘌呤为0.0002％，吲哚乙酸为0.00002％，余量为蒸馏水，该共培养培养基的pH值为5.8。

9、根据权利要求5所述的转基因番茄的制备方法，其特征是，第二步中所述的分化培养基的各组成成分的质量百分比为：MS粉为0.44％，蔗糖为3％，植物凝胶为0.26％，6-苄氨基嘌呤为0.0002％，吲哚乙酸为0.00002％，卡那霉素为0.005％，羧苄青霉素为0.025％，余量为蒸馏水，该分化培养基的pH值为5.8。

10、根据权利要求5所述的转基因番茄的制备方法，其特征是，所述生根培养基的各组成成分的质量百分比为：MS粉为0.44％，蔗糖为3％，植物凝胶为0.26％，6-苄氨基嘌呤为0.0002％，吲哚乙酸为0.00002％，卡那霉素为0.005％，羧苄青霉素为0.025％，余量为蒸馏水，该生根培养基的pH值为5.8。