[发明专利]甲砜基嘧啶类同位素标记试剂、合成方法及其用途

权利要求书

1.一种甲砜基嘧啶类同位素标记试剂，化学名为[d₆]-4，6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶，其结构式如下：

2.如权利要求1所述的甲砜基嘧啶类同位素标记试剂的合成方法，其特征是通过下述步骤合成：

4，6-二氯-2-甲硫基嘧啶溶于无水氘代甲醇中，逐步滴加到氘代甲醇钠溶液中，其中氘代甲醇钠溶液是通过金属钠溶于无水氘代甲醇中制备而成的，反应液在室温下搅拌8小时；过滤浓缩，然后溶解在去离子水中，用二氯甲烷萃取；合并有机相，干燥，旋干，得到中间体-[d₆]-4，6-二甲氧基-2-甲硫基嘧啶的粗产物；将上述的粗产物溶于无水二氯甲烷，加入3-氯过氧苯甲酸，混合物在室温下搅拌2小时，之后用饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应；有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，合并水层，用二氯甲烷萃取；然后合并有机相，干燥，旋干，得到最终的粗产品；再经过柱层析，得到重质同位素标记试剂-[d₆]-4，6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶。

3.一种如权利要求1所述的甲砜基嘧啶类同位素标记试剂的用途，其特征是用于半胱氨酸、含半胱氨酸的多肽或蛋白质的定性和相对定量分析。

4.如权利要求3所述的用途，其特征是采用下述步骤：

a)目标分析物半胱氨酸、含半胱氨酸的多肽或蛋白质经变性、还原、酶解；

b)目标分析物与轻质的同位素标记试剂[d₀]-4，6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶或重质的同位素标记试剂[d₆]-4，6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶反应；

c)将标记后的样品溶液直接进行基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析。

5.如权利要求4所述的用途，其特征是所述的a)步骤是将目标分析物(一对)置于缓冲溶液中，加入变性剂和还原剂，进行蛋白质的变性和还原后，将溶液稀释之后加入胰蛋白酶酶解；所述的b)步骤是在目标分析物溶液中分别加入一对同位素标记试剂即轻质的同位素标记试剂[d₀]-4，6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶和重质的同位素标记试剂[d₆]-4，6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶反应两小时，所述的c)步骤是将b)步骤反应后的二种样品溶液等量混合，进行基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析。

6.如权利要求5所述的用途，其特征是所述的目标分析物是半胱氨酸、含半胱氨酸的多肽、标准蛋白质、蛋白质混合物或不同生理状态下生物组织的蛋白提取物。

7.如权利要求5所述的用途，其特征是所述的缓冲溶液中含有0.03M的碳酸氢铵，pH 8.2，将目标分析物置于此溶液中进行变性和还原。

8.如权利要求5所述的用途，其特征是所述的变性剂是尿素，加入量为浓度8M；所述的还原剂是二硫苏糖醇，加入比例是二十倍的蛋白摩尔数；变性还原条件是37℃，6小时。

9.如权利要求5所述的用途，其特征是所述的样品溶液在1mg/mL的浓度下完成变性和还原操作，然后在稀释至0.5mg/mL的浓度下，按重量比50∶1加入胰蛋白酶，在37℃酶解8小时。

10.如权利要求5所述的用途，其特征是所述的标记反应在pH 6.5条件下进行，酶解过程完成后，用乙酸进行pH值的调整。

11.如权利要求5的用途，其特征是所述的还原、变性、酶解过程及标记反应均在恒温恒湿箱内完成。

12.如权利要求5所述的用途，其特征是基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析所用的条件是：基质为α-氰基-4-羟基肉桂酸，溶于含0.1％三氟乙酸的1∶1乙腈/水溶液中，浓度为6mg/mL；数据采集均在正离子、反射模式下进行。