[发明专利]早期糖尿病周围神经病变的检测芯片及其制备和应用

权利要求书

1.一种早期糖尿病周围神经病变的检测芯片，包括基片(1)、 反应池(2)和检测微阵列(3)，其特征在于，基片(1)是上表面沉 积有琼脂糖凝胶薄膜(10)的玻片(11)，琼脂糖凝胶薄膜(10)的 表面设置有反应池(2)，反应池(2)由中空正方形的硅橡胶框(4) 围成，反应池(2)的个数为n，n介于1～12，硅橡胶框(4)的边长 介于0.2mm～10mm，每个反应池(2)的池面上点有检测微阵列(3)， 检测微阵列(3)是由蛋白微型固相检测点排列而成的5行×m列的矩 形阵列，其中m是介于3～7的自然数，每一行的所有蛋白微型固相 检测点的成分都相同，5行蛋白微型固相检测微阵列点分别是HIgG 蛋白微型固相检测点(30)、Mc抗COPE蛋白微型固相检测点(31)、 Mc抗DEFA1蛋白微型固相检测点(32)、Mc抗NOTCH1蛋白微型 固相检测点(33)和Mc抗BCL-6蛋白微型固相检测点(34)。

2.一种早期糖尿病周围神经病变的检测芯片的制备方法，其特 征在于，以HIgG、Mc抗COPE、Mc抗DEFA1、Mc抗NOTCH1和 Mc抗BCL-6为原料，具体操作步骤：

第一步制备基片(1)

将1.0wt％～2.0wt％琼脂糖溶液30ml与10nmol/L NaIO₄溶液10ml 混合，搅拌均匀，得到混和液40ml，备用，用传统方法洗涤玻片(11) 并晾干，用胶框将1.0ml～4.0ml混和液封闭在玻片(11)上，室温冷 却，氮气吹干，琼脂糖凝胶薄膜(10)沉积于玻片(11)的表面，制 得基片(1)；

第二步制备五种不同蛋白的溶液

用PBS分别稀释五种蛋白HIgG、Mc抗COPE、Mc抗DEFA1、 Mc抗NOTCH1和Mc抗BCL-6至它们的浓度介于10μg/ml～200μg/ml， 得五种不同蛋白溶液；

第三步制备检测微阵列(3)

用点样仪或点样针将第二步制得的抗体溶液的液滴点在基片(1) 的表面上，每行用一种抗体溶液点出m个液滴作为m个微型检测点， m是介于3～7的自然数，第一行用五种抗体溶液中的一种，第二行用 剩余四种抗体溶液中的一种，余类推，点完五行后，在基片(1)的 表面上形成一个由5×m个微型检测点组成的矩形阵列，将基片(1) 放入湿盒中，室温孵育过夜，PBS洗涤2次，以BSA封闭未反应的 醛基，制得检测微阵列(3)；

第四步制备反应池(2)

用透明黏合剂将边长介于0.2mm～10mm的中空正方形的硅橡胶 框(4)以第三步制得的检测微阵列(3)正好落在其中空部分中的方 式黏贴在基片(1)的琼脂糖凝胶薄膜(10)上，形成反应池(2)， 至此制得早期糖尿病周围神经病变的检测芯片。

3.根据权利要求2所述的早期糖尿病周围神经病变的检测芯片 的制备方法，其特征在于，n是反应池(2)的个数，n介于1～12， 当n＞1时，只需重复n-1次权利要求2所述的方法的第三～第四步， 得反应池(2)的个数为n的早期糖尿病周围神经病变的检测芯片。