[发明专利]早期糖尿病周围神经病变的检测芯片及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种早期糖尿病周围神经病变的检测芯片及其制备 和应用，属医疗器械分子诊断的技术领域。

背景技术

随着经济的发展和人们生活方式的改变，以及人口老龄化，糖尿 病患者的数量迅速增加。糖尿病周围神经病变是糖尿病致残、致死的 主要原因，其诊断目前主要通过临床表现计分，并结合电生理检查技 术来明确，但上述现有方法操作复杂，检查准确性受患者配合度的限 制，且对早期周围神经病变的敏感度均较差，难以成为有效的筛查手 段，不能提供适应目前糖尿病周围神经病变患者所需要的早期准确诊 断的高通量标准化检测。

血清蛋白质水平改变常出现于疾病病理及功能改变的更早期，具 有成为预警和早期诊断指标的潜力。目前，对于血清中特异性蛋白的 检测主要依赖于ELISA技术，费用昂贵，而且需要较大量的标本和 试剂，限制了其在大规模筛选中的应用。蛋白芯片技术将各种蛋白质 有序地固定于载体上成为检测用的芯片，集微电子、微机械、化学物 理技术、计算机技术为一体，可同时对多种蛋白质进行检测分析，逐 步发展成为临床诊断等领域的重要技术手段。

但是，蛋白芯片的制备与分析也同时面临着更多的挑战。首先， 受血清蛋白质浓度限制，检测灵敏度难于达到应用研究中的要求；其 次，蛋白质本身复杂的分子结构与各向异向性，为蛋白质在芯片上的 有效固定增添了难度；此外，多个分析物的同时分析也为发展新的分 析模式提出了要求。

本发明利用质谱技术鉴定出的糖尿病周围神经病变患者外周血 清中具有临床诊断意义的标志性蛋白COPE、DEFA1、NOTCH1和 BCL-6，构建了一种用于临床诊断糖尿病周围神经病变的检测芯片， 通过优化试验条件实现了有效固定待测蛋白质抗体于基片，质量控制 稳定，数据分析标准化，检测结果可信度高的要求，为糖尿病周围神 经病变提供了一种非侵入性，敏感度和特异性均较好的筛检手段，以解 决现有糖尿病周围神经病变不易早期确诊和检测成本高的问题。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种早期糖尿病周围神经病变的检 测芯片。该检测芯片包括基片1、反应池2和检测微阵列3，其特征 在于，基片1是上表面沉积有琼脂糖凝胶薄膜10的玻片11，琼脂糖 凝胶薄膜的表面设置有反应池2，反应池2由中空正方形的硅橡胶框 4围成，反应池2的个数为n，n介于1～12，硅橡胶框4的边长介于 0.2mm～10mm，每个反应池2的池面上点有检测微阵列3，检测微阵 列3是由蛋白微型固相检测点排列而成的5行×m列的矩形阵列，其 中m是介于3～7的自然数，每一行的所有蛋白微型固相检测点的成 分都相同，5行蛋白微型固相检测微阵列点分别是HIgG蛋白微型固 相检测点30、Mc抗COPE蛋白微型固相检测点31、Mc抗DEFA1蛋 白微型固相检测点32、Mc抗NOTCH1蛋白微型固相检测点33和 Mc抗BCL-6蛋白微型固相检测点34。

本发明的第二个目的是提供所述检测芯片的制备方法。

实现上述目的，本发明采用以下技术方案，现详细说明如下。

一种早期糖尿病周围神经病变的检测芯片的制备方法，其特征在 于，以HIgG、Mc抗COPE、Mc抗DEFA1、Mc抗NOTCH1和Mc 抗BCL-6为原料，具体操作步骤：

第一步制备基片1

将1.0wt％～2.0wt％琼脂糖溶液30ml与10nmol/L NaIO₄溶液10ml 混合，搅拌均匀，得到混和液40ml，备用，用传统方法洗涤玻片11 并晾干，用胶框将1.0ml～4.0ml混和液封闭在玻片11上，室温冷却， 氮气吹干，琼脂糖凝胶薄膜10沉积于玻片11的表面，制得基片1；

第二步制备五种不同蛋白的溶液

用BPS分别稀释五种蛋白：HIgG、Mc抗COPE、Mc抗DEFA1、 Mc抗NOTCH1和Mc抗BCL-6至它们的浓度介于10μg/ml ～200μg/ml，得五种不同蛋白的溶液；

第三步制备检测微阵列3