[发明专利]一种喜树多倍体的诱导方法

权利要求书

1.一种喜树多倍体的诱导方法，其特征在于：选取喜树的茎或叶作为外植体，并进行消毒处理；将消毒后的外植体接种于愈伤组织培养基中进行培养；再将培养后的愈伤组织置于浓度为100mg/L～500mg/L的秋水仙碱溶液中浸泡12～48h，然后用无菌水进行冲洗，再转移到不含秋水仙碱的芽分化培养基上暗培养7天后，转入光照培养；待不定芽生长50天后对其进行多倍体鉴定，选取具有四倍体特征的不定芽转入增殖培养基中产生四倍体丛生芽，再将生长2cm以上的丛生芽分割为单株，转入壮苗培养基中进行培养，然后选择生长健壮的无根苗接种于生根培养基中，培养出喜树四倍体组培苗，当组培苗长至3cm以上时，打开瓶盖，在室内炼苗3～5天后，移栽到灭过菌的珍珠岩——田土的基质上；

上述愈伤组织培养基为：B₅+NAA0～1mg/L+2，4-D0.5～2mg/L+KT0.5mg/L；

上述芽分化培养基为：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.2mg/L；

上述增殖培养基为：MS+NAA0.1～0.5mg/L+6-BA1.0mg/L；

上述壮苗培养基为：MS+NAA0.05mg/L+6-BA0.3mg/L；

上述生根培养基为：1/2MS+NAA0.1～0.3mg/L+IBA1.0mg/L；

上述所有培养基的配制PH均为5.6～6.5，琼脂均为0.7～0.8％，其中愈伤组织培养基、芽分化培养基、增殖培养基和壮苗培养基中蔗糖含量为30g/L，生根培养基中蔗糖含量为15g/L；

上述所有培养基的培养条件为：温度23～27℃、每天光照12小时、光照强度1500～2000Lx。

2.根据权利要求1所述的一种喜树多倍体的诱导方法，其特征在于：多倍体的鉴定方法是取生长50天后的不定芽于0.2％秋水仙素溶液中预处理2.3～2.7小时后，用水冲洗，然后用体积比为3∶1的甲醇—冰醋酸固定液固定3.5～4.5小时，接着用纤维素酶和果胶酶各占2.5％的混合酶在25℃恒温箱内处理2.8～3.2小时，倒去酶液，用蒸馏水冲洗2～3次，每次2分钟，再去除蒸馏水，制备细胞悬液，并用悬滴法制片，待干燥后用改良苯酚品红染色后观察，如染色体的数目均为2n＝4x＝88，则确定为四倍体不定芽。

3.根据权利要求1或2所述的一种喜树多倍体的诱导方法，其特征在于：外植体消毒所采用消毒液为浓度是70％-75％的酒精和浓度是0.1％的升汞。

4.根据权利要求1或2所述的一种喜树多倍体的诱导方法，其特征在于：珍珠岩—田土的基质中珍珠岩与田土的配比为3∶7，组培苗移栽至珍珠岩—田土的基质后，应适当遮光，并保持相对湿度在75～85％。

5.根据权利要求3所述的一种喜树多倍体的诱导方法，其特征在于：珍珠岩—田土的基质中珍珠岩与田土的配比为3∶7，组培苗移栽至珍珠岩—田土的基质后，应适当遮光，并保持相对湿度在75～85％。