[发明专利]黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱

权利要求书

1.黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括下述主要步骤：

(1)对照品溶液的制备：

称取芒炳花素对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：

黄芪药材供试品溶液的制备：称取黄芪药材粉末，加80～95％甲醇超声处理10～60min，滤过，用80～95％甲醇洗涤滤渣、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，置水浴上挥干，残渣用80～95％的甲醇转移至量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，放置0.4h～1.0h，用微孔直径为0.35-0.55μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得黄芪药材供试品溶液；

黄芪中间体供试品溶液的制备：称取黄芪中间体，置量瓶中，加80～95％甲醇不超过刻度，超声处理10～60min，加同种溶剂至刻度，摇匀，用微孔直径为0.35-0.55μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得黄芪中间体供试品溶液；

黄芪制剂供试品溶液的制备：取黄芪制剂，研细，称取，加80～95％甲醇超声处理10～60min，滤过，用80～95％甲醇洗涤滤渣、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，置水浴上挥干，残渣用80～95％的甲醇转移至量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，放置0.4h～1.0h后，用微孔直径为0.35-0.55μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得黄芪制剂供试品溶液；

(3)HPLC检测：

分别吸取上述对照品溶液和各供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图；

其中，色谱条件为：

色谱柱为C₁₈反相色谱柱；柱温为30℃；检测波长为210nm；流动相A为体积百分比为3％的乙腈水溶液，流动相B为体积百分比为60％的乙腈水溶液，总流速为1.0ml/min；

采用下述梯度洗脱方式洗脱：

在100min内，流动相A的流速从1.0ml/min匀速减至0ml/min，流动相B则从0ml/min匀速增至1.0ml/min，总流速保持为1.0ml/min；流动相A和B经过混合器混合后进入色谱柱进行洗脱。

2.根据权利要求1所述的黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，

其特征在于：所述步骤(2)供试品溶液的制备按照下述方法进行：

黄芪药材供试品溶液的制备：称取黄芪药材粉末1.0～5.0g，加80～95％甲醇20～150ml超声处理20～40min，滤过，用同种溶剂洗涤滤渣、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，置水浴上挥干，残渣用80～95％的甲醇转移至5～25ml量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，放置0.4h～1.0h，用微孔直径为0.35-0.55μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得黄芪药材供试品溶液；

黄芪中间体供试品溶液的制备：称取黄芪浸膏2.0～10.0g，置25～50ml量瓶中，加80～95％甲醇不超过刻度，超声处理20～40min，加同种溶剂至刻度，摇匀，用微孔直径为0.35-0.55μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得黄芪中间体供试品溶液；

黄芪制剂供试品溶液的制备：取黄芪颗粒，研细，称取1.0～10.0g，加80～95％甲醇20～150ml，超声处理20～40min，滤过，用同种溶剂洗涤滤渣、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，置水浴上挥干，残渣用80～95％的甲醇转移至5～25ml量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，放置0.4h～1.0h，用微孔直径为0.35-0.55μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得黄芪制剂供试品溶液。3.根据权利要求1所述的黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的色谱柱是柱长为250mm的C₁₈反相色谱柱。