[发明专利]黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域，特别涉及一种黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，并由此得到其标准指纹图谱。

背景技术

黄芪又称膜荚黄芪或黄耆，为豆科、多年生草本。主根长，圆柱形，稍带木质，外质土黄色或棕红色。喜干旱，适应性强。分布河北、山西、陕西、甘肃、青海、辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古等地。

黄芪的根是著名的常用中药。商品黄芪呈圆柱形，略扭曲，长20～60厘米，以条粗长、皱纹少、质坚而绵、粉性足、味甜者为好。主要含有香豆素、黄酮类化合物、皂苷及微量叶酸和数种维生素等。其味甘，微温，具有补气固表，托疮生肌、利水的功效，主治气血虚弱、自汗、久泻脱肛、子宫脱垂、肾炎浮肿、蛋白尿、糖尿病、慢性溃疡等症。近年来临床也用于治疗高血压和急慢性肾炎等。

黄芪颗粒是以黄芪药材为原料经过提取制成的颗粒剂，其制备过程中需要将黄芪药材进行水提、浓缩为清膏等步骤处理。在此制备过程中，对黄芪药材、中间体(即黄芪浸膏)以及制剂(即黄芪颗粒，包括有糖型和无糖型)，都需要采取一定的质量控制措施，以保证产品的质量和功效等；而传统的黄芪颗粒质量控制方法中，仅仅只采用了薄层色谱法对其中含有的黄芪甲苷进行了定性鉴别，没有更为可靠的质量控制方法；对于黄芪药材和中间体，更没有任何质量控制措施。这对其终产品黄芪颗粒的质量和功效保证等都是远远不够的。

发明内容

本发明的目的就是针对上述黄芪药材、中间体及其制剂的质量控制现状，提供一种基于高效液相色谱法的黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法。通过该检测方法可得到黄芪药材、中间体及其制剂的HPLC(高效液相色谱)指纹图谱，有利于对其原料药材、中间体及其终产品质量的有效控制及保证其临床疗效。

本发明的另一个目的是提供一种上述黄芪药材、中间体及其制剂的标准指纹图谱。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括下述主要步骤：

(1)对照品溶液的制备：

称取芒炳花素对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：

黄芪药材供试品溶液的制备：称取黄芪药材粉末，加80～95％甲醇溶液超声处理10～60min，滤过，用适量80～95％甲醇洗涤滤渣、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，置水浴上挥干，残渣用80～95％的甲醇转移至量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，放置0.4h～1.0h，用微孔滤膜0.35-0.55μm滤过，取续滤液，即得黄芪药材供试品溶液；

黄芪中间体供试品溶液的制备：称取黄芪中间体(黄芪浸膏)，置量瓶中，加80～95％甲醇适量(以不超过刻度为准)，超声处理10～60min，加同种溶剂至刻度，摇匀，用微孔滤膜(微孔直径0.35-0.55μm)滤过，取续滤液，即得黄芪中间体供试品溶液；

黄芪制剂(黄芪颗粒，包括有糖型和无糖型，下同)供试品溶液的制备：取黄芪颗粒，研细，称取，加80～95％甲醇超声处理10～60min，滤过，用适量80～95％洗涤滤渣、滤纸和漏斗，洗液并入滤液中，置水浴上挥干，残渣用80～95％甲醇转移至量瓶中，加同种溶剂稀释至刻度，摇匀，放置0.4h～1.0h后，用微孔滤膜(微孔直径0.35-0.55μm)滤过，取续滤液，即得黄芪制剂供试品溶液；

(3)HPLC检测：

分别吸取等体积或不等体积的上述对照品溶液和各供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。

色谱条件：

色谱柱为C₁₈反相色谱柱，以柱长为250mm的C₁₈反相色谱柱为佳；柱温为30℃；检测波长为210nm；流动相A为3％(体积百分比)的乙腈水溶液，流动相B为60％(体积百分比)的乙腈水溶液，总流速为1.0ml/min；

采用下述梯度洗脱方式：

在100min内，流动相A的流速从1.0ml/min匀速减至0ml/min，流动相B则从0ml/min匀速增至1.0ml/min，总流速保持为1.0ml/min；流动相A和B经过混合器混合后进入色谱柱进行洗脱。

上述黄芪药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法中，步骤(2)供试品溶液的制备可优选下述方法进行：