[发明专利]测定牛奶、猪肝、鸡肝和动物饲料中盐酸克伦特罗含量的酶联免疫吸附分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定牛奶、猪肝、鸡肝和动物饲料中盐酸克伦特罗含量的酶联免疫 吸附分析方法(ELISA)，属于食品安全监督或食品分析的研究领域。

背景技术

盐酸克伦特罗(CL)，俗称瘦肉精，化学名：α-(叔丁氨基)甲基-4-氨基-3，5-二氯苯 甲醇盐酸盐，英文名：Clenbuterol hydrochloride，是一种人工合成的β-肾上腺素受体药 物，它可选择性地作用于肾上腺素β2受体，引起交感神经兴奋，在治疗剂量下，具有 松弛气管平滑肌作用，用于治疗哮喘，由于其对子宫平滑肌有较强松弛作用，也常用于 延迟分娩。20世纪80年代，研究发现将一定量的盐酸克伦特罗加入动物饲料中，能够 改变营养物质的代谢途径，促进动物肌肉特别是骨胳肌蛋白质的合成，同时抑制脂肪合 成，从而促进动物生长，增加瘦肉率，于是盐酸克伦特罗在世界范围内作为动物饲料添 加剂被广泛应用(Kuiper H.A.et al.Illegal use of β-adrenergic agonists： International.Journal of Animal Science1998，76：195-207；Prezelj A.et al. Abuse of clenbuterol and its detection.Current Medicinal Chemistry.2003， 10：281-290)。它的添加给经营者带来巨大的利润，但是由于其在畜产品中的残留，给 广大消费者的身体健康也造成了极大危害。

在家畜生产中使用的有效剂量一般是哮喘剂量的5～10倍，有较强的药性，溶解代 谢率低，不易大量代谢排出，残留量较高。盐酸克伦特罗化学性质稳定，一般高温难以 分解，作为一类激素，通过腺体深入到组织细胞膜内发挥作用，难以代谢清除。盐酸克 伦特罗在动物血管系统中发生作用，使气管扩张，影响肌肉蛋白质代谢、脂肪代谢及肝 脏中的糖代谢，严重影响动物正常的生长发育。人们食用含有盐酸克伦特罗残留的动物 性食品，产生恶心、呕吐、头晕、心悸、乏力、面部和四肢肌肉颤动等现象，对高血压、 心脏病患者危害更大，易引起心动过速、心室早搏、甚至危及生命。国内外曾发生多起 由盐酸克伦特罗引起的食物中毒事件(Pulce C.D.et al.Collective human food poisonings by CLenbutenol residues in Vealliver.Veterinary and human toxicology，.1991，33：480-481；柯华等.一起盐酸克伦特罗引起食物中毒的调查与 尿样检测.中国卫生监督杂志，2003，10(2)：91-93)，各国政府都禁止将盐酸克伦特罗 作为饲料添加剂用于肉用动物的生产。我国农业部多次发布文件，禁止在饲料中使用盐 酸克伦特罗，并严格检测市场肉制品中盐酸克伦特罗的含量(中华人民共和国农业部农 牧发[1997]3号；[2002]193号)。

测定盐酸克伦特罗含量的方法主要有两类，一类是色谱分析方法，包括了高效液相 色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱傅立叶红外联用法、 毛细管区带电泳法等。我国颁布的检测血液、组织等样品中盐酸克伦特罗的HPLC标准 方法(GB/T5009.192-2003)，是利用BOS(经碱去活处理)或ODS反相C18烷基硅胶柱 (255nm×4.6mm，5μm)对样品进行分离，选择波长为244nm，流速1.0mL/min，室温 条件，检出限5ng/g。但是色谱法仪器昂贵、样品预处理复杂、费时、检测成本高；另 一类是免疫分析方法，主要是酶联免疫吸附分析方法和胶体金免疫分析方法，各种品牌 的这两种免疫分析方法的快速检测试剂盒在市场上均有销售，但是，目前见到的测定盐 酸克伦特罗的免疫分析方法的灵敏度不高，迫待改进。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种测定测定牛奶、猪肝、鸡肝和动物 饲料中盐酸克伦特罗含量的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)，其特点是以抗体和抗原 与抗体之间特异性反应为基础而建立的高灵敏度、高特异性的分析方法。

本发明的目的由以下技术措施实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为重量份 数。

测定牛奶、猪肝、鸡肝和动物饲料中盐酸克伦特罗含量的酶联免疫吸附分析方法

(1)盐酸克伦特罗修饰物的制备