[发明专利]抗对虾白斑综合症病毒重组伤寒沙门氏菌株及制备和用途

权利要求书

1.一种分离的蛋白质，其序列为SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的一种分离的蛋白质，其特征在于，所述的氨基酸序列所对应的 核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.一种基因工程菌株，该菌株为重组基因工程菌株减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella  typhimurium)W0420/pcDNA3.1(-)-VP28-CD，CCTCC No：M208072。

4.一种权利要求3所述的减毒鼠伤寒沙门氏菌的基因工程菌株的制备方法，它包括下 列步骤：

A、wssvVP28基因的制备：于冰上取病虾的腮、胃、肝内脏，加入10倍体积W/V的 TN缓冲液于匀浆器中，缓冲液为20mmol/L Tris-HCl；0.4mol/L NaCl，pH7.4，冰浴匀浆， 8000r/min，离心5min，取上清液，加入蛋白酶K 100μg/mL，DS缓冲液50mmol/L KCl； 10mmol/L Tris-HCl，pH8.3；明胶0.1mg/mL；NP-40，0.45％，于沸水中煮10-15min，冰浴 5min，12000rpm高速离心，取其上清液做模板DNA，根据Genbank中编号为DQ979620的 wssv VP28基因的序列设计引物，用PCR扩增得到VP28基因的序列；

B、家蚕抗菌肽基因的制备：通过大肠杆菌JM109诱导家蚕，按照RNA提取试剂盒的 方法提取其脂肪体总RNA，根据编号为AB010825的CD基因的序列设计引物，按照反转 录试剂盒的方法进行cDNA合成和PCR扩增，得到CD基因的序列；

C、融合基因的制备及真核表达载体质粒的构建：VP28和CD基因间通过酶切位点Hind III连接融合，二者之间使用编码5个甘氨酸的碱基序列作为接头，将该融合基因克隆到真核 表达载体pcDNA3.1(-)中，构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-VP28-CD；

D、将所构建的真核表达质粒pcDNA3.1(-)-VP28-CD，通过电转的方法，转化到减毒鼠 伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium W0420中，得到预防对虾白斑综合症病毒的口服DNA 疫苗。

5.权利要求3所述的一种基因工程菌株在制备治疗或预防对虾白斑综合症病毒的药物 中的应用。