[发明专利]一种利用蚯蚓肠道活性酶酶解鱼蛋白生产活性肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶解鱼蛋白生产活性肽的方法，尤其涉及一种利用蚯蚓肠道活性酶酶解鱼蛋白生产活性肽的方法。

技术背景

活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物。由两个或两个以上的氨基酸通过肽键连接而成。

活性肽对人的机体生理作用主要体现在：免疫调节、抗高血压、降低血脂、抗氧化、抗疲劳、抑制肿瘤等方面，可广泛应用于药品、食品、保健、化妆等领域，在发达国家和地区已经形成巨大的消费市场。

活性肽的主要来源可分为天然存在的活性肽，人工合成的活性肽和蛋白质水解产生的活性肽。天然活性肽分布于陆地和海洋生物体中，含量甚微，提取困难，不易实现产业化。人工合成技术要求高，成本昂贵，实际使用价值低。蛋白质水解有化学法和酶法之分。化学法以酸或碱断开蛋白质的肽键，由于反应环境极端，不利于活性保持；而酶解蛋白质生产活性肽的安全性却很高，能在温和条件下定位水解分裂产生特定的肽，且水解过程易控制，因而近几年报道的活性肽制备方法均为酶解法。酶的选择是酶解法生产活性肽的关键，目前主流的生产工艺都是采用各种蛋白酶，由于蛋白酶价格较高，造成活性肽生产成本难以下降。因此寻找一种低成本的酶用于酶解蛋白质生产活性肽具有十分重要的意义。

蚯蚓是一种蛋白质含量达70％的软体多汁动物，喜食腐质有机物。其肠道中含有蛋白酶、脂肪酶、纤维酶、淀粉酶等多种活性酶，可将腐质有机物酶解后转化成自身或其它生物易于利用的活性物质，同时产生蛋白质和氨基酸，具有较高的经济价值和药用价值。我国传统医学早已将蚯蚓入药，用于治疗各种相关疾病。近些年来，科学界利用蚯蚓的特性，在环保、医药、饲料、肥料、保健品、化妆品等方面开展了广泛深入的研究，取得了很多成果，蚯蚓的利用受到极大的关注。

发明内容

本发明目的就是利用蚯蚓肠道分泌的活性酶酶解鱼蛋白，并将鱼蛋白转化为活性蛋白肽，而提出一种利用鲜活蚯蚓肠道活性酶酶解鱼蛋白生产活性蛋白肽的方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种用鲜活蚯蚓肠道活性酶酶解鱼蛋白生产活性肽的方法，其特征在于：按以下步骤进行：(1)将蚯蚓洗净、捣碎、匀浆，加水稀释，蚯蚓量与加入的水量(w/w)比为1∶5～40，调PH值5.0～8.5，超声波提取和冷冻离心10分钟得上清液为活性酶液；超声波功率为300W，超声时间为100～400s，冷冻离心机为3500r/min；(2)按常规方法取活性酶液与鱼蛋白混匀酶解，再经灭酶、脱色、膜精制、浓缩、喷雾干燥，得到小分子活性肽，加入活性酶的量为蚯蚓量与鱼重量比(w/w)为4‰～12‰∶1。

在上述方案中，提取活性酶的PH值为5.5～7.0。

在上述方案中，提取活性酶时，蚯蚓量与加入的水量(w/w)比为1∶10～20。

在上述方案中，提取活性酶时，超声波提取时间为200～300s。

在上述方案中，酶解鱼蛋白时，加入活性酶的量为蚯蚓量与鱼重量比(w/w)为6‰～7‰∶1。

本发明采用蚯蚓肠道活性酶酶解鱼蛋白方法，可大幅度降低生产成本，酶解度达64％以上，适用于工业化生产。

具体实施方式

实施例1

称取1000g蚯蚓，进行捣碎、匀浆预处理，添加10kg水，拌匀，调PH值为5.5～6.5，在超声波功率为300W，超声波提取300s，放入3500r/min控温离心机中离心10min，取上清液活性酶液放入冰箱中备用；

称取1kg鲢鱼，将鲢鱼粉碎、匀浆，按蚯蚓量∶鱼量(w/w)为＝6‰∶1取活性酶液66g加入鱼浆中对鱼蛋白进行酶解，再经90℃，30min灭酶、活性炭脱色、超滤膜精制、浓缩、干燥，得350g活性肽，产品色浅黄色，水溶性好，蛋白质含量75％，重金属2ppm，其中超滤膜精制中的膜元件孔径为10nm，工作压力0.5MPa，工作温度40℃。

实施例2

操作方法同实施例1，提取酶条件为PH7～7.5，其余同实施例1，得310g产品，产品色浅黄色，水溶，蛋白质含量72％，重金属2.3ppm。

实施例3

操作方法同实施例1，提取酶条件稀释用水量为20kg，按蚯蚓量∶鱼量(w/w)为＝6‰∶1取活性酶液126g加入鱼浆中对鱼蛋白进行酶解，其它条件同实施例1，得产品重380g，产品呈浅黄色，水溶，蛋白质含量75％，重金属1.8ppm。

实施例4

操作方法同实施例1，提取酶条件中超声波提取200s，其它条件同实施例1，得产品重350g，产品呈浅黄色，水溶，蛋白质含量73％，重金属1.9ppm。

实施例5