[发明专利]一种用于筛选小麦叶锈病抗性的引物序列及其应用无效

专利信息
申请号: 200810049873.6 申请日: 2008-05-27
公开(公告)号: CN101302564A 公开(公告)日: 2008-11-12
发明(设计)人: 郑天存;何中虎;夏先春;李新平;杨光宇;殷贵鸿;韩玉林;黄峰;王丽娜 申请(专利权)人: 周口市农业科学院;中国农业科学院作物科学研究所
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12N15/11
代理公司: 郑州联科专利事务所(普通合伙) 代理人: 刘建芳
地址: 466001河*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 用于 筛选 小麦 叶锈病 抗性 引物 序列 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种用于筛选小麦叶锈病抗性的引物,其特征在于所述引物包括wmc419和barc181两组引物,其中wmc419的上游引物序列为:

5′-GTTTCGGATAAAACCGGAGTGC-3′,下游引物序列为:

5′-ACTACTTGTGGGTTATCACCAGCC-3′;barc181的上游引物序列为:

5′-CGCTGGAGGGGGTAAGTCATCAC-3′,下游引物序列为:

5′-CGCAAATCAAGAACACGGGAGAAAGAA-3’。

2.如权利要求1所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用。

3.如权利要求2所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于所述应用为:以待测小麦基因组DNA为模板、wmc419和barc181为引物进行PCR扩增,再对扩增产物进行分离检测,若扩增产物中含有153bp和165bp大小的条带,则待测小麦有叶锈病抗性。

4.如权利要求3所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于筛选方法如下:

1)提取待测小麦基因组DNA为模板;

2)以wmc419和barc181为引物、待测小麦基因组DNA为模板,进行PCR扩增:

20μL PCR反应体系组成如下:

待测小麦基因组DNA 20~100ng,Taq酶0.5~1.2U,上下游引物(4μmol·L-1)各0.5~1.5μL,dNTP(10mmol·L-1)0.2~0.6μL,10×PCR缓冲液2μL,余量为无菌蒸馏水;

PCR反应条件为:

94℃预变性4min,随后94℃变性1min,引物为wmc419和barc181的退火温度分别为60℃和58℃,退火时间为1min,72℃延伸1min,进行35个循环;最后72℃延伸10min,4℃保存;

3)对扩增产物进行分离检测:在扩增产物中加入变性载样指示剂,94℃变性10min后冷却,然后在浓度为6%的变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离,银染显色,若扩增产物中含有153bp和165bp大小的条带,则待测小麦有叶锈病抗性。

5.如权利要求4所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于PCR反应体系每20μL组成如下:

待测小麦基因组DNA 60ng,Taq酶1.0U,上下游引物(4μmol·L-1)各1.2μL,dNTP(10mmol·L-1)0.4μL,10×PCR缓冲液2μL,余量为无菌蒸馏水。

6.如权利要求4所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于所述步骤3)中变性载样指示剂组成为:98%(v/v)无离子甲酰胺,10mmol·L-1EDTA(pH8.0),0.25%(w/v)溴酚蓝,0.25%(w/v)二甲苯氢氟。

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