[发明专利]一种用于筛选小麦叶锈病抗性的引物序列及其应用无效
申请号: | 200810049873.6 | 申请日: | 2008-05-27 |
公开(公告)号: | CN101302564A | 公开(公告)日: | 2008-11-12 |
发明(设计)人: | 郑天存;何中虎;夏先春;李新平;杨光宇;殷贵鸿;韩玉林;黄峰;王丽娜 | 申请(专利权)人: | 周口市农业科学院;中国农业科学院作物科学研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 郑州联科专利事务所(普通合伙) | 代理人: | 刘建芳 |
地址: | 466001河*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 筛选 小麦 叶锈病 抗性 引物 序列 及其 应用 | ||
1.一种用于筛选小麦叶锈病抗性的引物,其特征在于所述引物包括wmc419和barc181两组引物,其中wmc419的上游引物序列为:
5′-GTTTCGGATAAAACCGGAGTGC-3′,下游引物序列为:
5′-ACTACTTGTGGGTTATCACCAGCC-3′;barc181的上游引物序列为:
5′-CGCTGGAGGGGGTAAGTCATCAC-3′,下游引物序列为:
5′-CGCAAATCAAGAACACGGGAGAAAGAA-3’。
2.如权利要求1所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用。
3.如权利要求2所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于所述应用为:以待测小麦基因组DNA为模板、wmc419和barc181为引物进行PCR扩增,再对扩增产物进行分离检测,若扩增产物中含有153bp和165bp大小的条带,则待测小麦有叶锈病抗性。
4.如权利要求3所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于筛选方法如下:
1)提取待测小麦基因组DNA为模板;
2)以wmc419和barc181为引物、待测小麦基因组DNA为模板,进行PCR扩增:
20μL PCR反应体系组成如下:
待测小麦基因组DNA 20~100ng,Taq酶0.5~1.2U,上下游引物(4μmol·L-1)各0.5~1.5μL,dNTP(10mmol·L-1)0.2~0.6μL,10×PCR缓冲液2μL,余量为无菌蒸馏水;
PCR反应条件为:
94℃预变性4min,随后94℃变性1min,引物为wmc419和barc181的退火温度分别为60℃和58℃,退火时间为1min,72℃延伸1min,进行35个循环;最后72℃延伸10min,4℃保存;
3)对扩增产物进行分离检测:在扩增产物中加入变性载样指示剂,94℃变性10min后冷却,然后在浓度为6%的变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离,银染显色,若扩增产物中含有153bp和165bp大小的条带,则待测小麦有叶锈病抗性。
5.如权利要求4所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于PCR反应体系每20μL组成如下:
待测小麦基因组DNA 60ng,Taq酶1.0U,上下游引物(4μmol·L-1)各1.2μL,dNTP(10mmol·L-1)0.4μL,10×PCR缓冲液2μL,余量为无菌蒸馏水。
6.如权利要求4所述的引物在筛选小麦叶锈病抗性中的应用,其特征在于所述步骤3)中变性载样指示剂组成为:98%(v/v)无离子甲酰胺,10mmol·L-1EDTA(pH8.0),0.25%(w/v)溴酚蓝,0.25%(w/v)二甲苯氢氟。
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