[发明专利]用甲基营养酵母生产重组人表皮生长因子受体2胞内区的方法

权利要求书

1、一种使用甲基营养酵母生产重组人her2/neu ICD蛋白的方法，该方法包 括：在以甲醇为碳源和能源的培养基中培养甲基营养酵母，其中所说的甲基营养 酵母是用包括下列可操作地连接的元件的DNA构建体转化的：(1)甲基可诱导的 转录启动子；(2)编码人her2/neu ICD的DNA片段；(3)转录终止子和(4)可 选择标志，从而以至少100mg/L培养基的浓度得到重组人her2/neu ICD蛋白。

2、根据权利要求1的方法，其中所说的甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母， 并且所说的甲基可诱导的启动子和转录终止子均来自巴斯德毕赤酵母AOX1基 因。

3、用于表达重组人her2/neu ICD的甲基营养酵母培养物，该酵母能够依靠 作为碳源和能源的甲醇生长，并且该酵母是被包括甲基可诱导的转录启动子、编 码人her2/neu ICD的DNA片段、转录终止子和可选择标志的DNA构建体转化 的。

4、用于在巴斯德毕赤酵母中表达重组人her2/neu ICD蛋白的DNA构建体， 该构建体包括可操作地连接的元件：甲基可诱导的转录启动子、编码人her2/neu ICD的DNA片段、转录终止子和可选择标志。

5、根据权利要求4的构建体，其中所说的甲基营养酵母是巴斯德毕赤酵母， 并且甲基可诱导的启动子和转录终止子均来自巴斯德毕赤酵母AOX1基因。

6、使用巴斯德毕赤酵母大规模生产重组人her2/neu ICD蛋白的优化的发酵 培养条件，特征在于其中发酵温度维持在28℃～30℃、所使用的pH值为4.4、 发酵液的DO值(溶解氧)保持在25％～30％、并且培养基中添加有0.5％(W/V) 的蛋白胨。

7、纯化her2/neu ICD的方法，特征在于使用阳离子交换层析技术分离。