[发明专利]人参二醇组皂苷微生物转化产物及其制备方法

权利要求书

1.下述通式(I)人参二醇组皂苷微生物转化产物：4，4，8，10，14α，20α-六甲基-20-羟基-5β-甾-2，12-二烯-24-酸

其中R表示氢或葡萄糖基。

2.按照权利要求1的微生物转化产物，其中R表示葡萄糖基，化学名称：4，4，8，10，14α，20α-六甲基-5β-甾-2，12-二烯-24-酸-20-β-D-葡萄糖苷。

3.按照权利要求1的微生物转化产物，其中R表示氢，化学名称：4，4，8，10，14α，20α-六甲基-20-羟基-5β-甾-2，12-二烯-24-酸。

4、权利要求1的人参二醇组皂苷微生物合成产物的制备方法，该方法包括以下步骤：

a.生晒参须根取须根粗粉，用稀酸调pH值为3～4，超声提取，超声时间每次30分钟抽滤，合并滤液，上D-101大孔吸附树脂柱，蒸馏水至无色且为中性，再用稀碱洗柱至流出液成碱性，再蒸馏水洗至中性且澄清无色，用75％乙醇洗脱至流出液无皂苷反应为止，将乙醇洗脱液减压回收至干，残渣即为人参皂苷粗品；

b.将人参总皂苷粗品溶于20倍量的95％乙醇中超声溶解，抽滤，滤液减压回收至干，残渣即为精制人参皂苷；

c.取人参皂苷溶于乙醇，利用溶解度梯度，通过稀碱调节pH值使二醇型皂苷沉淀析出；

d.将半知菌纲、丝孢菌目、丝孢菌科、拟青霉属的淡紫拟青霉菌种接种到装有PD培养基的三角瓶中，以摇床摇速60～80r/min在摇床上振荡培养菌丝球三天，直径大约为3～4mm；

e.将以分离得到的人参二醇组皂苷用少量甲醇溶解，加入到培养后的菌液中，使皂苷浓度分别保持为1.0mg/mL，以摇速80r/min培养一周；

f.将发酵液过滤，残渣加蒸馏水超声提取3次，每次10分钟，并入滤液，减压浓缩至100mL，用氯仿萃取、正丁醇萃取至无皂苷反应，合并氯仿、正丁醇萃取液，回收溶剂至干；

g.合并氯仿和正丁醇萃取物，先用D-101大孔树脂75％乙醇洗脱除去色素至无皂苷反应，回收乙醇得褐黄色固体粉末即人参二醇组皂苷微生物转化后产物；

h.人参二醇组皂苷微生物转化产物用硅胶柱层析进行粗分，其中流动相：氯仿∶甲醇＝5∶1，得到(I)人参二醇组皂苷微生物合成产物。

5.按权利要求4中a步骤中稀酸为5～7％醋酸；稀碱为1％氢氧化钠溶液。

6.按照权利要求4的方法，其中步骤d中所述PD培养基配方为土豆200g；水1000mL；蔗糖20g，搅拌溶解，分装封好瓶口后湿热灭菌即制成PD液体培养基。

7.按照权利要求4的方法，其中步骤C中所述具体方法：总皂苷溶于95％乙醇中过滤备用；将0.3％氢氧化钠-乙醇溶液滴加入总皂苷的95％乙醇溶液中有沉淀析出，放置过夜；过滤得沉淀干燥即得人参二醇组皂苷即为原料。