[发明专利]作为特异性识别肿瘤细胞的探针分子的制备方法

权利要求书

1、一种作为特异性识别肿瘤细胞的探针分子的制备方法，其特征在于，有聚乙二醇-叶酸的合成、表面连有氨基的树枝状分子-聚乙二醇-叶酸的合成、功能性量子点制备的过程：

所述的聚乙二醇-叶酸的合成，是用生物相容的叶酸来修饰两侧为氨基的聚二乙醇(PEG)，合成出一侧为氨基另一侧为叶酸的聚乙二醇；

所述的树枝状分子-聚乙二醇-叶酸的合成，是将聚酰胺-胺溶解在水或甲醇中；在冰盐浴的条件下，按聚酰胺-胺和叶酸的摩尔比为1∶1～128，将聚酰胺-胺溶液滴入一侧为氨基另一侧为叶酸的聚乙二醇中，滴加完毕撤掉冰盐浴，室温反应4～48小时得到中间产物；再在冰盐浴的条件下，按聚酰胺-胺和乙二胺的摩尔比为1∶2～32，直接将中间产物滴加到乙二胺中，滴加完毕撤掉冰盐浴，室温反应4～48小时；除去溶剂得到浅黄色固体，经过透析处理得到表面连有氨基的树枝状分子-聚乙二醇-叶酸；

所述的功能性量子点制备，是将表面连有油溶性配体的量子点溶解在氯仿或甲苯中，中间产物溶解在甲醇或水中，将两种溶液混合，用四甲基氢氧化胺控制pH值在6～12之间，在40～80℃反应2～10小时，冷却至室温后，用乙酸乙酯或丙酮洗后，得到的固体溶解在水中，过滤除去溶剂后得到目标产物。

2、按照权利要求1所述的作为特异性识别肿瘤细胞的探针分子的制备方法，其特征在于，所述的聚乙二醇-叶酸的合成，是将等摩尔的叶酸和两侧为氨基的聚乙二醇溶解在二甲亚砜或二甲基甲酰胺中，然后加入与聚乙二醇-叶酸等摩尔量的N，N’-二环己基碳酰亚胺，和与聚乙二醇-叶酸等摩尔量的三乙胺或吡啶，室温反应3～24小时；混合溶液经离心后，上清液用PH＝6～12的缓冲溶液透析，再用去离子水透析；除去溶剂后，得到浅黄色固体，即为一侧为氨基另一侧为叶酸的聚乙二醇。

3、按照权利要求1所述的作为特异性识别肿瘤细胞的探针分子的制备方法，其特征在于，所述的聚乙二醇-叶酸的合成是，(1)将等摩尔量的两侧为氨基的聚乙二醇和二碳酸二叔丁酯溶解在甲醇中，然后向其中滴加三乙胺或吡啶，回流搅拌8～20小时，冷却至室温，旋蒸，除去溶剂；再用二氯甲烷溶解，在-10℃～20℃下，用体积比为1∶1～5的乙醚∶己烷混合溶剂沉淀，过滤，得到白色粉末；(2)将上述白色粉末产物与过量的叶酸溶解在二甲亚砜中，然后向其中逐滴加入过量的三乙胺和N，N’-二环己基碳酰亚胺，40～90℃反应8～20小时，冷却至室温，用乙醚沉淀，过滤，得到的产物用再用少量二氯甲烷溶解后，在-10℃～20℃下，用体积比为1∶2的乙醚∶己烷混合溶剂沉淀，过滤，得到浅黄色粉末；(3)将上述浅黄色粉末产物溶解在过量的三氟乙酸和二氯甲烷，或者盐酸和水中，室温搅拌3～24小时，除去溶剂后得到固体重新溶解在二氯甲烷中，在-10℃～20℃下，用体积比为1∶1～5的乙醚∶己烷混合溶剂沉淀，过滤，得到浅黄色粉末状的一侧为氨基另一侧为叶酸的聚乙二醇。

4、按照权利要求1或2或3所述的作为特异性识别肿瘤细胞的探针分子的制备方法，其特征在于，所述的聚酰胺-胺是2.5～6.5代的树枝状聚合物。

5、按照权利要求1或2或3所述的作为特异性识别肿瘤细胞的探针分子的制备方法，其特征在于，所述的聚酰胺-胺(PAMAM)是2.5～6.5代的树枝状聚合物；所述的量子点包括II-VI和III-V的量子点以及它们组成的核-壳结构的量子点，具体是表面连有TOPO或十六胺或十八胺的CdS、ZnS、HgS、GdSe、ZnSe、HgSe、GdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag₂S、CdS/PbS、CdS/Cd(OH)₂、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe或Fe₃O₄磁性纳米粒子。