[发明专利]隐孢子虫属及微小隐孢子虫种特异PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种隐孢子虫属及微小隐孢子虫种特异PCR检测试剂盒，包括以下部分：

(1)DNA裂解液：含不同浓度的NaCl、Tris-HCl、EDTA、SDS和蛋白酶K的混合溶液；各浓度配比为：NaCl 100mM、Tris-HCl(pH7.5)20Mm、EDTA25 Mm、SDS 2％(w/v)和蛋白酶K 0.1μg/μl；

(2)PCR反应液：终浓度各100-300μM的4种dNTPs，终浓度各0.5-3pmol/μl的引物CF、CR、HF和HR，1.5-4.5mM的Mg²⁺浓度；Taq酶按每个PCR反应(20μl)含2.0U加入，反应液中不含Taq酶；

(3)隐孢子虫属和微小隐孢子虫种特异性引物：

属特异性诊断引物：CF：5’-ATTGGAGGTTGTTCCTTACTCCT-3’

CR：5’-AGCCGCCCATAGAATCAAGAA-3’

种特异性诊断引物：HF：5′-TAAGAAGCCACCAAGAAGGCG-3′

HR：5′-TCAATAGGCTTAAATGGGTTCGGGA-3

(4)阳性对照：阳性对照为微小隐孢子虫基因组DNA。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中PCR反应液中4种dNTPs的终浓度为各250μM，引物HF、HR和CF、CR和终浓度各为0.5pmol/μl，Mg²⁺终浓度为1.5mM。