[发明专利]肿瘤抑素T7肽及其衍生物T7-NGR的载体构建及表达无效
| 申请号： | 200810052320.6 | 申请日： | 2008-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN101519658A | 公开（公告）日： | 2009-09-02 |
| 发明（设计）人： | 宋娜玲;贺欣;赵启仁;颜廷东;张春明;王德芝;刘鉴峰;胡亚楠;褚丽萍;温镭 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院放射医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12;C12N15/62;C07K14/78;C07K19/00;A61K38/39;A61K38/10;A61P35/00 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 | 代理人： | 朱红星 |
| 地址： | 300192*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肿瘤 t7 及其 衍生物 ngr 载体 构建 表达 | ||
1、一种含有肿瘤抑素T7肽基因序列的重组质粒，具有克隆载体功能，其特征在于：该重组质粒在其多克隆区域中的限制性内切酶酶切位点NdeI与HindIII之间定向克隆连接了肿瘤抑素T7肽基因序列，该重组质粒被命名为pMD-T7。
2、一种含有肿瘤抑素T7肽基因序列的重组质粒，具有表达载体功能，其特征在于：该重组质粒在其多克隆区域中的限制性内切酶酶切位点NdeI与HindIII之间定向克隆连接了肿瘤抑素T7肽基因序列，该重组质粒被命名为pET-T7。
3、一种含有肿瘤抑素T7肽衍生物—T7-NGR基因序列的重组质粒，具有克隆载体功能，其特征在于：该重组质粒在其多克隆区域中的限制性内切酶酶切位点NdeI与HindIII之间定向克隆连接了肿瘤抑素T7肽衍生物—T7-NGR基因序列，该重组质粒被命名为pMD-T7N。
4、一种含有肿瘤抑素T7肽衍生物—T7-NGR基因序列的重组质粒，具有表达载体功能，其特征在于：该重组质粒在其多克隆区域中的限制性内切酶酶切位点NdeI与HindIII之间定向克隆连接了肿瘤抑素T7肽衍生物—T7-NGR基因序列，该重组质粒被命名为pET-T7N。
5、如权利要求4所述T7-NGR基因序列，其特征在于该基因序列的氨基酸序列为：TMPFLFCNVNDVCNFASRNDYSYWLGSCNGRCVSGCAGRC。
6、如权利要求4所述T7-NGR基因序列，其特征在于该基因序列的核苷酸序列为：ACCATGCCGTTCTTATTCTGCAATGTCAATGATGTATGTAATTTTGCATCTCGAAACGACTATAGCTACTGGCTGGGATCCTGCAACGGTCGTTGCGTGAGCGGTTGCGCGGGTCGTTGC。
7、一种权利要求4所述重组T7-NGR表达质粒的构建及表达方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：
(1)在T7-NGR所对应的核苷酸序列，上游和下游分别引入Nde I和HindIII酶切位点及终止密码子，在T7肽与NGR的基因序列之间引入BamH I酶切位点，并克隆入pMD-18Tsimple载体，该克隆被命名为pMD-T7N；
(2)经酶切和测序鉴定后，将克隆载体双酶切，经1.2％低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后，切下目的片段，与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应，而后转化感受态E.coli DH5α。构建了肿瘤抑素T7-NGR的克隆载体pET-T7N；
(3)阳性克隆经酶切和测序鉴定，转化感受态E.coli BL21(DE3)，IPTG诱导表达，得到肿瘤抑素T7肽衍生物—T7-NGR融合蛋白。
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