[发明专利]雄甾-1,4,6-三烯-3,17-二酮的制备方法

权利要求书

1、一种雄甾-1，4，6-三烯-3，17-二酮的制备方法，其特征是采用如下合成路线：

该合成路线由以下反应步骤构成

(1)3-位保护

将化合物(I)加入极性有机溶剂中，加入酯类试剂和酸催化剂得到化合物(II)。

(2)6，7位双键

将步骤(1)所得的化合物(II)加入到有机溶剂中，加入卤化试剂和水进行卤化反应，反应完成后，再加入锂盐反应得到化合物(III)。

(3)1，4，6-三烯的合成

将步骤(2)所得化合物(III)利用采用节杆菌进行生物发酵的方法进行1，2位脱氢，得到目标化合物。

2、如权利要求1所述的制备方法，其特征是所述步骤(1)中的极性有机溶剂优选乙醇、甲醇、丙酮、四氢呋喃中的一种或几种，所用酯类试剂优选原甲酸三乙酯、乙酸异丙烯酯中的一种或几种，酸催化剂优选对甲基苯磺酸(PTS)、吡啶溴氢酸盐、吡啶盐酸盐中的一种或几种，反应温度为-10℃～20℃；化合物(I)∶极性有机溶剂＝1∶1～10(重量体积比)，化合物(I)∶酯类试剂∶酸催化剂＝1∶1～3∶0.01～0.1(摩尔比)。

3、如权利要求2所述的制备方法，其特征是所述步骤(1)中的极性有机溶剂优选乙醇或甲醇，所用酯类试剂可选原甲酸三乙酯。

4、如权利要求1至3中任一所述的制备方法，其特征是所述步骤(2)中选用的有机溶剂优选作为非质子溶剂的烷烃如正己烷、环己烷，醚类如乙醚、四氢呋喃、二氧六环，DMF中的一种或几种；所选用的锂盐包括但不仅限于碳酸锂(Li₂CO₃)，氯化锂(LiCl)、溴化锂(LiBr)中的一种或几种；卤化试剂选自二溴海因、二氯海因、溴代琥珀酰亚胺(NBS)、氯代琥珀酰亚胺(NCS)中的一种或几种，卤化阶段反应温度选自-10℃到30℃，加入锂盐后反应温度优选60℃～100℃；在步骤(2)中化合物(II)∶有机溶剂＝1∶1～10(重量体积比)，化合物(I)∶卤化试剂∶锂盐(以锂离子计)＝1∶1.2～2∶1.2～2(摩尔比)。

5、如权利要求4所述的制备方法，其特征是所述所述步骤(2)中选用的有机溶剂优选DMF或二氧六环；步骤(2)中的卤化试剂优选溴代琥珀酰亚胺(NBS)，所选用的锂盐优选Li₂CO₃和LiBr的组合；卤化阶段反应温度选自0℃到20℃。

6、如权利要求1至5中任一所述的制备方法，其特征是步骤(3)生物发酵工艺如下：

7、如权利要求7所述的制备方法，其特征是加入作为底物的化合物(III)时以不溶于水的有机溶剂使底物溶解或成混悬液，加入到培养好的发酵液中，控制发酵液pH≥7.5。，有机溶剂与化合物(III)的体积重量比为2～5∶1；终止反应后，用有机溶剂萃取发酵液、静置分层，取有机层减压浓缩得到化合物(IV)

8、如权利要求8所述的制备方法，其特征是所述步骤(3)使底物溶解或成混悬液的不溶于水的有机溶剂可选自但不仅限于乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙酸丁酯、环己烷、丁醇、甲苯中的一种或几种

9、如权利要求6至8中任一所述的制备方法，其特征是所述步骤(3)在发酵液中加入加入有机溶剂的同时加入作为人工电子受体的苯醌和/或二甲基对苯醌。

10、如权利要求6至9中任一所述的制备方法，其特征是所述的生物发酵的菌种为节杆菌((拉丁命名：Arthrobacter sp.保藏编号：AS1.8中国科学院微生物研究所提供)。