[发明专利]一种快速检测转基因玉米BT11的方法

权利要求书

1.用于检测转基因玉米BT11的特异性引物，其特征在于由正向外引物：AGGGATTCTTGGATTTTTGG，反向外引物：AGAAATGGTTTCCACCAGAA；正向内引物：ATGAAAATAGCCATGAGCGACCATCCATTTCTTGGTCTAAAATCTGT，反向内引物GGCCATTTATCATCGACCAGAGGAATGTAATCTATGGCAAGGAA组成。

2.一种采用权利要求1所述特异性引物快速检测转基因玉米BT11方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用权利要求1所述的4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，加入模板DNA，在63-65℃进行45-60min扩增，并且在80℃持续2min终止反应，4℃保存；

其中的扩增反应体系：扩增反应的总体积为25μL，其各种成分分别为：10×Buffer 2.5μL，4M甜菜碱6.25μL，0.2M MgSO4 0.25μL，引物混合液1μL，10μM dNTPs 3.5μL，8000U/L Bst DNA聚合酶大片段1-5μL，模板DNA 1-5μL，用灭菌去离子水 补齐到25μL；

(2)扩增反应结束，取体系液3-25μL，采用不同方法判断扩增与否，包括：直接向扩增管中加入嵌入剂SYBR Green，通过颜色变化观察有无扩增反应；或评估扩增副产物焦磷酸镁白色沉淀物的量来观察有无扩增反应；或通过观察琼脂糖凝胶电泳条带判断扩增结果；其中所述的引物混合液指的是将合成的引物粉末分别配成浓度为100μM的母液，然后取外引物各1μL，内引物各8μL，加灭菌去离子水2μL，充分混合，制得引物混合溶液。

3.如权利要求2所述的检测方法，其中嵌入剂SYBR Green加入量为1-2μL。

4.如权利要求2所述的检测方法，其中所述的链置换活性的DNA聚合酶为8000U/L Bst DNA聚合酶大片段1-2μL。