[发明专利]一种快速检测转基因抗虫水稻的方法

权利要求书

1.用于检测苏云金杆菌杀虫结晶蛋白转基因抗虫水稻的特异性引物，其特征在于，包括外引物正向序列：AGGATTCACTGGTGGAGA，外引物反向序列：GATTATCCAAGGAGGTAGCT；内引物正向序列：TGGGAAGTGAATTGGAACTTCAATACCTCGTTAGACTCAACAGC，内引物反向序列TCTACCAGATATAGAGTTCGTGTGAGAAGATGGATGAATTACCCCAA。

2.一种采用权利要求1所述特异性引物快速检测苏云金杆菌杀虫结晶蛋白转基因抗虫水稻方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用权利要求1所述的4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，加入模板DNA，在63-65℃进行45-60min，并且在80℃持续2min，4℃保存；

其中的扩增反应体系：扩增反应的总体积为25μL，其各种成分分别为：10×Buffer 2.5μL，4M甜菜碱6.25μL，0.2M MgSO4 0.25μL，引物混合液1μL，10μM dNTPs 3.5μL，8000U/L Bst DNA聚合酶大片段1-5μL，模板DNA 1-5μL，用灭菌去离子水补齐到25μL；

(2)扩增反应结束，取体系液3-25μL，采用不同方法判断扩增与否，包括：直接向扩增管中加入嵌入剂SYBR Green，通过颜色变化观察有无扩增反应；或评估扩增副产物焦磷酸镁白色沉淀物的量来观察有无扩增反应；或通过观察琼脂糖凝胶电泳条带判断扩增结果。

3.如权利要求2所述的检测方法，其中所述的引物混合溶液指的是将合成的引物粉末分别配成浓度为100μM的母液，然后取外引物各1μL，内引物各8μL，加灭菌去离子水2μL，充分混合，制得引物混合溶液。

4.如权利要求2所述的检测方法，其中嵌入剂SYBR Green加入量为1-2μL。

5.如权利要求2所述的检测方法，其中所述的链置换活性的DNA聚合酶为8000U/L Bst DNA聚合酶大片段1-2μL。