[发明专利]一种快速检测转基因抗虫水稻的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及转基因产品的检测方法，具体说是一种快速检测转基因抗虫水稻的方法，通过肉眼观察反应管浊度或观察加入1000×SYBR Green后颜色变化或观察琼脂糖凝胶电泳来判断扩增情况。

背景技术

转基因工程自20世纪70年代诞生以来，已经取得迅速的发展。在1996～1999年全球共有12个国家种植转基因农作物。美国是转基因农作物种植面积最大的国家，中国居第4位，但种植面积仅占全球总面积的1％。目前，转基因生物技术的研究，大多分布在抗虫基因工程、抗病基因工程、抗逆基因工程、品质基因工程、品质改良基因工程、控制发育的基因工程等领域。如抗虫基因工程将Bt基因导入棉花、玉米、水稻、烟草、马铃薯等作物，毒杀害虫；或将胶蛋白酶抑制剂基因导入作物，干扰害虫消化作用，而导致害虫死亡。中国农科院、中国农业大学、中国科学院、河南农科院等许多科研单位和高校将几丁质酶和葡聚糖酶双价基因导入小麦育成抗病转基因小麦、转基因烟草、转基因水稻等等。英国爱丁堡大学将水母发光基因导入烟草、芹菜、马铃薯等作物，获得发光作物，驱赶害虫。目前在其它转基因工程方面也取得了许多成果，在此不能一一例举。总之在作物种类方面，大多集中在大豆、玉米、棉花、油菜、马铃薯、南瓜、木瓜、西葫芦七大类作物。

转基因水稻获得成功始于1986年，Uchimiya等首先获得了卡那霉素抗性的转基因水稻愈伤组织，相隔2年，世界上就有3个实验室分别获得了转基因水稻植株。纵观转基因水稻的发展历程，利用转基因技术开展水稻遗传改良主要集中在下列几个方面：

1抗虫性

应用于水稻抗虫性改良的外源基因主要有3种，一是从苏云金杆菌分离的苏云金杆菌杀虫结晶蛋白基因(Bt基因)，二是从植物中分离出的昆虫蛋白酶抑制剂(PI基因)，三是植物凝集素基因。科学家分别应用基因枪法、农杆菌介导法、电击法等成功地将cryIA(b)、cryIA(c)基因导入水稻中，获得了转基因植株，经抗虫性检测，转基因植株对二化螟、三化螟、大螟、稻纵卷叶螟等具有明显的致死效应。美国康奈尔大学1993年将豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CPT导入水稻获得转基因植株，对二化螟、三化螟具有一定的抗性。Vain等将半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因导入水稻所得的转基因植株使线虫的孵化率下降了55％。浙江大学应用Bt基因转化育成的“克螟稻”已通过了浙江省科技厅的鉴定，1999年获准开展环境释放试验。

2抗病性

日本国家农业环境所成功地将水稻条纹叶枯病毒外壳蛋白基因RS VCP导入水稻获得转基因植株，接种后2～3周发现转基因植株只有2％～3％发病，而对照则有95％～100％发病。

Christou等将Xa21基因导入水稻后，显著提高了水稻对白叶枯病和稻瘟病的抗性。何迎春等将烟草几丁质酶基因导入水稻获得了高抗纹枯病和稻瘟病转基因植株。四川农业大学将抗病和抗虫基因导入杂交稻的恢复系中，获得了转基因的双抗杂交稻等。

3抗除草剂

20世纪80年代，美国孟山都公司以其拥有广谱、高效除草剂农达(草甘膦)的优势，率先开展除草剂抗菌性基因的转移研究与抗性品种的开发，随后，美国艾格福公司(AgrEvo)抗广谱除草剂草铵膦转基因水稻和美国氰胺公司的抗咪唑啉酮类除草剂转基因水稻相继问世。中国用于水稻抗除草剂的基因主要是PPT乙酰转移酶基因，即抗Basta基因(bar)，目前也已获得抗Basta水稻。

4抗逆性

由于有关水稻抗逆基因的定位、克隆和分离工作难度较大，抗逆转基因水稻的研究报道还不多。目前已经导入水稻的抗逆基因主要有烟草中的CMO基因、甜菜碱生物合成酶基因codA和水稻耐淹能力有关的基因(pdc，pdc，pdc)，将其转入水稻中分别获得了具有抗旱、耐碱、耐盐和耐渍的转基因水稻植株。

5高产和优质性状