[发明专利]快速检测水溶液中半胱氨酸的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及半胱氨酸检测技术，具体属于一种快速检测水溶液中半胱氨酸的方法，包括检测试剂盒及检测试纸。

背景技术：

半胱氨酸(Cysteine，简称Cys)是一个重要的硫代化合物氨基酸，参与了各种重要的细胞功能，包括蛋白质的合成、解毒和代谢；在生物的新陈代谢中，半胱氨酸参与细胞的还原过程，具有调节肝脏内磷脂的代谢和保护肝脏细胞免受毒物损害等功能。紊乱的半胱氨酸的代谢会导致胱氨酸病——一种染色体隐性遗传疾病所产生的缺陷病。体内半胱氨酸含量的增多与高同型半胱氨酸血症相牵连，会引起一些威胁生命的生理疾病，包括阿尔茨海默氏症(老年痴呆症：李荥娟，闫福岭，现代医学，2005，33，195)、帕金森氏病(王文霞，臧卫周，冯艳，徐军，医药论坛杂志，2005，9，20)及心脑血管疾病(周宪梁，胡爱华，惠汰太等.中华心血管病杂志，1999，27，121)。低水平的半胱氨酸将导致发育缓慢，头发色素脱失，肌肉水肿，精神不振嗜睡，肝损伤等病状，因此建立快速、准确、灵敏的半胱氨酸的检测方法具有重要的意义，也是预防和监测由它们所引发的疾病的重要措施之一。

目前，关于测定溶液中的半胱氨酸，国内外对检测溶液中的半胱氨酸的方法可归纳为以下几种：

1、高效液相色谱测定法((G.Chwatko，E.Bald，Talanta，2000，52，509)；

2、电化学测定法(杜宝中，姚秉华，薛力等.分析科学学报，2004，20，622)；

3、化学发光法(张韶虹，史伯安，郗娟，分析实验室，2007，26，5)；

4、酶法(韩庆宏，徐明旭，谭玉英，唐莉，中国发明专利，02823051.5.)；

5、荧光光谱测定方法(邱海鸥，席永清，曾凡蓉，杨明，汤志勇，分析实验室，2006，25，34)

6、比色检测分析方法(郭勇，邵士俊，蒋生祥，师彦平，徐健，中国发明专利，200410092788.X)

但以上的这些方法都分别存在一些不利因素，例如：

1、高效液相色谱、电化学测定法需要借助复杂的仪器，且需要预处理标本且不能全自动化，操作复杂，费时费力，限制了其在临床上的应用；

2、酶免法虽然有较好的灵敏性和特异性，但因为是生物制剂，价格昂贵，亦限制了其推广应用；

3、其他的分析法因为要在有机或半水溶液中进行测定，容易造成二次污染，因此也存在一定的局限性。

所以，发展一种简单灵敏的水溶液中检测半胱氨酸的方法是非常必要的。

发明内容：

本发明的目的在于突破以往传统的检测半胱氨酸的方法，提供一种简单、灵敏、快速的检测水溶液中半胱氨酸的方法。

本发明提供的快速检测水溶液中半胱氨酸的方法，是基于二价铜Cu²⁺离子、以二甲酚橙为显色剂在pH为6.0的HEPES缓冲溶液中直接定性定量地检测半胱氨酸，其具体检测方法如下：

本发明提供的一种快速检测水溶液中半胱氨酸的方法(光谱法检测)，包括如下步骤：

(1)、配制pH5.5-6.5浓度1-100mM的HEPES缓冲溶液，并配制2×10^-3M的Cu²⁺溶液、2×10^-3M的二甲酚橙溶液；

(2)、把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中，作为空白，用微量进样器吸取2×10^-3M的二甲酚橙溶液25μl，加到上述比色皿中，此时溶液由无色变黄，在紫外可见分光光度仪上检测，441nm有最大吸收；

(3)、在步骤(2)的比色皿中，加入与二甲酚橙等量的Cu²⁺溶液，此时溶液由黄变紫红，在紫外可见分光光度仪上检测，发现最大吸收峰由上述的441nm变为572nm；

(4)、取半胱氨酸水溶液，逐渐用微量进样器加到步骤(3)比色皿中，边加样边在紫外可见分光光度仪上检测，随着半胱氨酸水溶液的加入，最大吸收峰又由572nm逐渐向441nm变回，溶液的颜色也逐渐由紫红变回黄色，此时441nm吸收峰达到最大值，停止加半胱氨酸水溶液，此时加入半胱氨酸水溶液体积计为V_半胱氨酸；

(5)、按[Cu²⁺]×4×25μl/V_半胱氨酸μl计算出半胱氨酸的含量。

本发明提供的另一种快速检测水溶液中半胱氨酸的方法(溶液比色法-试剂盒法)，包括如下步骤：