[发明专利]防止高度聚合的重组人乳头瘤病毒L1蛋白的修饰序列

权利要求书

1、一种防止高度聚合的重组人乳头瘤病毒L1蛋白的修饰氨基酸序列，其特征在于通过对编码野生型HPV L1蛋白的DNA序列进行定点碱基替代突变，由突变后的DNA序列表达得到的重组HPV L1蛋白氨基酸序列，该重组HPV L1蛋白氨基酸序列在不影响L1蛋白生物活性的前提下，不能形成L1蛋白二级和高级结构中的H4α螺旋结构。

2、根据权利要求1所述的氨基酸序列，其特征在于所述的替代突变区域的替换起始位点为野生型HPV L1蛋白氨基酸序列中向保守序列LβγWN或LβγWQ的N端移动1-2个氨基酸处，替换截止位点为向保守序列DP的C端移动1-2个氨基酸处，替代突变方式为将上述区域内的氨基酸全部或部分替代成由2-10个极性氨基酸组成的连接短肽，其中，β表示E或D，γ表示E、D或N。

3、根据权利要求2所述的氨基酸序列，其特征在于所述的替代突变区域为野生型HPVL1蛋白氨基酸序列中的保守序列LβγWN或LβγWQ至其下游的保守序列DP之间的区域，其中，β表示E或D，γ表示E、D或N。

4、根据权利要求2所述的氨基酸序列，其特征在于所述的连接短肽由S和G组成。

5、根据权利要求2所述的氨基酸序列，其中所述的HPV型选自HPV1、HPV2、HPV3、HPV4、HPV5、HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV42、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV54、HPV56、HPV57、HPV58、HPV59、HPV61、HPV66、HPV67、HPV70、HPV72、HPV73、HPV82，其对应的氨基酸修饰序列分别如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：31所示。

6、一种核苷酸序列，其特征在于它包含编码权利要求1-5之任一权利要求所述的氨基酸序列的核苷酸序列。

7、根据权利要求6所述的核苷酸序列，其特征在于它编码权利要求1-5之任一权利要求所述的氨基酸序列。

8、一种表达载体，其特征在于它由商业上可获得的质粒、细菌噬菌体和粘粒等连接载体和权利要求6所述的核苷酸序列所组成。

9、根据权利要求8所述的表达载体，其特征在于所述的连接载体选自pGEX-4T-1、pGEX-4T-2、pGEX-4T-3、pGEX-6P-1、pGEX-6P-2、pGEX-6P-3、pET-28a、pcDNA3.1以及其它商业上可获得的表达质粒。

10、一种转化子，其特征在于它是将权利要求8所述的表达载体转入宿主细胞中所得，所述的宿主细胞选自大肠杆菌、昆虫细胞、酵母细胞中的任意一种。

11、一种HPV L1蛋白的五聚体，其特征在于它由权利要求10所述的转化子诱导表达得到。

12、一种生产HPV L1蛋白五聚体的方法，它包括如下步骤：

(1)发酵培养权利要求10所述的转化子，并表达HPV L1蛋白；

(2)分离、纯化表达产物，得到HPV L1蛋白五聚体。

13、根据权利要求12所述的HPV L1蛋白五聚体在制备预防HPV感染的重组疫苗、免疫诊断抗原或抗体、以及药物组合物中的应用。