[发明专利]重组蛋白提取纯化方法

权利要求书

1.一种重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，包括：工程菌发酵、工程菌破碎、包涵体洗涤、重组蛋白变性纯化、重组蛋白二次变性纯化、变性重组蛋白复性、复性重组蛋白放置、离子交换层析、分子筛层析。

2.根据权利要求1所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述复性重组蛋白放置具体为：将复性重组蛋白在温度2-8℃下放置5-8天。

3.根据权利要求1所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述复性重组蛋白放置具体为：将复性重组蛋白在温度4℃下放置7天。

4.根据权利要求1～3中任一权利要求所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述工程菌发酵具体为：将工程菌采用高密度配方培养基发酵，所述高密度配方培养基包括5-15g/L胰蛋白胨、15-25g/L酵母提取物、7.5-17.5g/L水解酶蛋白、1-9g/L KH₂PO₄、10-20g/L葡萄糖。

5.根据权利要求4所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述高密度配方培养基包括10g/L胰蛋白胨、20g/L酵母提取物、12.5g/L水解酶蛋白、4g/L KH₂PO₄、15g/L葡萄糖。

6.根据权利要求4所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述将工程菌采用高密度配方培养基发酵中还包括步骤：定时连续滴加递增量的所述高密度配方培养基。

7.根据权利要求4所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述将工程菌采用高密度配方培养基发酵中还包括步骤：将发酵后期的所述工程菌在温度42℃下诱导3-4小时。

8.根据权利要求7所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述将发酵后期的所述工程菌在温度42℃下诱导3-4小时具体为：将发酵后期的所述工程菌在温度42℃下诱导3.5小时。

9.根据权利要求4所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述工程菌破碎具体为：将工程菌用第一缓冲液洗涤、离心，留沉淀，加入溶菌酶的同时加入第二缓冲液于温度4℃搅拌，温度-20℃静置过夜，化冻后用匀质机在压力200-500Pa下破碎至镜检细菌破碎率大于98％。

10.根据权利要求4所述的重组蛋白提取纯化方法，其特征在于，所述变性重组蛋白复性具体为：将变性重组蛋白溶解于浓度为6-8mol/L第三缓冲液，并调整蛋白浓度为8-10mg/ml，然后缓慢加入第四缓冲液，在80-100分钟内逐步将第三缓冲液中的尿素浓度稀释至0.1ml/L，最后于温度4℃下用第五缓冲液透析或超滤平衡，除去第四缓冲液。