[发明专利]诱导人胚胎干细胞定向分化为肝细胞的方法及专用培养基有效
| 申请号： | 200810057539.5 | 申请日： | 2008-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN101497872A | 公开（公告）日： | 2009-08-05 |
| 发明（设计）人： | 裴雪涛;裴海云;王韫芳;白宗良;杨印祥;习佳飞;岳文;南雪;白慈贤 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 |
| 主分类号： | C12N5/08 | 分类号： | C12N5/08 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 邸万杰 |
| 地址： | 100850*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 胚胎 干细胞 定向 化为 肝细胞 方法 专用 培养基 | ||
1.用于体外诱导人胚胎干细胞定向分化为肝细胞的培养基，包括依次使用的以 下四种培养基：其中，
分化培养基Ⅰ即拟胚体分化培养基：是在DF-12培养基的基础上添加了15-25％ 血清替代物，0.05-0.15mM β-巯基乙醇和0.5-1.5mM谷氨酰胺，pH 7.2-7.6；
分化培养基Ⅱ即定型内胚层分化培养基：是在DF-12培养基的基础上添加了 0.5-1.5％胎牛血清，0.05-0.15mM β-巯基乙醇，0.5-1.5mM谷氨酰胺，和100ng/mL 活化素A，pH 7.2-7.6；
分化培养基Ⅲ即肝细胞诱导条件培养基：是按体积比1-4∶4-1比例混合的FLSC 条件培养液与HepatoZYME-SFM，pH 7.2-7.6，所述FLSC条件培养液的配方为：每100mL 培养基含HDMEM培养基45mL，DF-12培养基45mL，胎牛血清10mL；
分化培养基Ⅳ即肝细胞诱导分化培养基：是在分化培养基Ⅲ的基础上添加了 15-25ng/mL肝细胞生长因子HGF，5-15ng/mL制瘤素OSM和10-6-10-8M地塞米松DEX， pH 7.2-7.6。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述分化培养基Ⅰ和分化培养 基Ⅱ中β-巯基乙醇的浓度为0.1mM，谷氨酰胺的浓度为1mM；所述分化培养基Ⅲ中FLSC 条件培养液与HepatoZYME-SFM按1∶1比例混合；所述分化培养基Ⅳ中添加了20ng/mL 肝细胞生长因子HGF，10ng/mL制瘤素OSM和10-7mM地塞米松DEX。
3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于：所述分化培养基Ⅰ和分化 培养基Ⅱ中还添加有作为营养物质的体积百分浓度0.5-1.5％的非必需氨基酸。
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