[发明专利]一种治疗肝衰竭的药物及其制备方法

权利要求书

1.一种治疗肝衰竭的药物，它的有效成分为采用微囊技术混合包裹的肝细胞和 表达重组人碱性成纤维细胞生长因子的人胎肝基质细胞，所述肝细胞和表达重组人碱 性成纤维细胞生长因子的人胎肝基质细胞的混合比例为10～1∶1；所述肝细胞来源于 大鼠、小鼠或猪，或经大鼠、小鼠、猪或人的干细胞诱导而来的肝细胞或肝样细胞； 所述表达重组人碱性成纤维细胞生长因子的人胎肝基质细胞为转染重组人碱性成纤 维细胞生长因子基因的重组人胎肝基质细胞。

2.一种制备权利要求1所述的治疗肝衰竭的药物的方法，包括以下步骤：

1)将肝细胞制成悬液与表达重组人碱性成纤维细胞生长因子的人胎肝基质细胞 混合形成细胞混合物；

2)将步骤1)获得的细胞混合物微囊化，得到治疗肝衰竭的药物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中用Seglen胶原酶 /EGTA两步灌注法制备肝细胞悬液：将肝细胞重悬于含8-12％小牛血清的1640培养 液中，然后测定细胞存活率，若存活率大于90％，得到肝细胞悬液。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中将肝细胞与表达重 组人碱性成纤维细胞生长因子的人胎肝基质细胞混合物微囊化的方法为：对步骤1) 获得的细胞悬液进行离心，弃上清液，将细胞沉淀重悬于质量/体积百分浓度为 1.0-2.0％的藻酸钠溶液中，然后将细胞悬液置于气流式微囊形成仪中，调整气流量 为2-6L/min，用3-6号针尖打出，滴入质量/体积百分浓度为1.0-2.0％的氯化钙溶 液中，静置20-30min后，洗涤；然后，将混合细胞置入质量/体积百分浓度为0.05-0.15 ％的多聚赖氨酸溶液中静置4-8min，洗涤；再将混合细胞置入质量/体积百分浓度为 0.1-0.2％的藻酸钠溶液中，静置2-6min，洗涤；最后，将混合细胞加入质量/体积 百分浓度为1.0-2.0％的柠檬酸三钠溶液中，静置3-7min，洗涤，得到微囊化的肝细 胞与表达重组人碱性成纤维细胞生长因子的人胎肝基质细胞混合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述洗涤液均为生理盐水。