[发明专利]诱导马铃薯晚疫病菌产生致病性分泌蛋白的方法无效
| 申请号： | 200810058273.6 | 申请日： | 2008-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN101250573A | 公开（公告）日： | 2008-08-27 |
| 发明（设计）人： | 周晓罡;孙茂林;张绍松;丁玉梅 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 昆明正原专利代理有限责任公司 | 代理人： | 金耀生 |
| 地址： | 65022*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 马铃薯 晚疫病 产生 致病性 分泌 蛋白 方法 | ||
1.诱导马铃薯晚疫病菌产生致病性分泌蛋白的方法，其步骤为：
(1)将马铃薯晚疫病病样置于普通水琼脂培养基，16～18℃黑暗保湿培养2～3天；普通水琼脂培养基由以下部分组成：琼脂粉10g/L、H2O 1L；
(2)叶片上长出灰白色霉层，用接种针挑取少量菌丝接种到普通固体培养基，16～18℃暗培养8～10天，形成较大菌落；普通固体培养基由以下部分组成：黑麦浸出液450ml、番茄汁150ml、琼脂粉10g/L、CaCO3 1.2g/L、阿莫西林100mg/L、五氯硝基苯30mg/L、利福平10mg/L、制霉菌素10mg/L、H2O 1L；
(3)用接种针挑取5块约0.5cm2的菌丝块转接到100mL致病性分泌蛋白液体诱导培养基中，18℃，150rpm振荡培养14～16天；致病性分泌蛋白液体诱导培养基由以下部分组成：黑麦浸出液450ml、CaCO3 1.2g/L、KH2PO4 0.5g/L、MgSO4·7H2O 0.25g/L、天门冬酰胺1g/L、VB1 1mg/L、阿莫西林100mg/L、五氯硝基苯30mg/L、利福平10mg/L、制霉菌素10mg/L、H2O 1L；
(4)用双层灭菌滤纸滤去菌丝体，滤液经4000rpm离心10min，上清液加入硫酸铵697g/L，10000rpm离心20min，沉淀经透析处理，透析带截流范围为1KD，冻干后获得马铃薯晚疫病菌致病性分泌蛋白提取物，-20℃保存。
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