[发明专利]一种诱导恶性肿瘤细胞凋亡的方法和用途

权利要求书

1.一种诱导恶性肿瘤细胞凋亡的方法，其特征在于该方法直接用CD176 (Thomsen-Friedenreich肿瘤相关抗原，TF，Galβ1-3GalNAcα1-R和 Galβ1-3GalNAcβ1-R)的自然抗体或合成的人源化抗体、合成的结合CD176(TF) 的重组蛋白和多肽、提取的结合CD176(TF)抗原的植物或动物凝集素，结合恶 性肿瘤细胞膜上的CD176(TF)，诱导恶性肿瘤细胞凋亡；其具体步骤如下：

a.用抗CD176(TF)单克隆抗体作为第一抗体，荧光素标记的羊抗鼠作为第 二抗体，对培养的恶性肿瘤细胞株进行染色，用流式细胞仪检测染色结果；同时， 用浓度为每毫升5微单位的唾液酸酶(Neuraminidase from Vibrio cholerae) 在37℃下处理恶性肿瘤细胞株1小时，或用浓度为每毫升2微单位的阿尔法2-3 唾液酸酶(α2-3sialidase)在37℃下处理恶性肿瘤细胞株度90分钟，再用抗 CD176(TF)抗体和荧光素标记的羊抗鼠进行染色，用流式细胞仪检测染色结果； 未用唾液酸酶和阿尔法2-3唾液酸酶处理的细胞系，部分细胞系CD176(TF)呈 强阳性，部分细胞系CD176(TF)呈阳性，部分细胞系CD176(TF)呈弱阳性或 阴性：用唾液酸酶处理的细胞系，所有细胞系CD176(TF)呈强阳性：用阿尔法 2-3唾液酸酶处理的细胞系，部分细胞系CD176(TF)呈强阳性，部分细胞系CD176 (TF)呈阳性，部分细胞系CD176(TF)呈弱阳性或阴性；

b.用CD176(TF)抗体孵育培养恶性肿瘤细胞株，抗体浓度分别为每毫升1 微克、每毫升5微克、每毫升10微克，孵育条件为37℃下处理5小时或过夜， 孵育后分别用荧光素标记的Annexin V或Nicoletti染色，用流式细胞仪检测； 用鼠浆细胞瘤来源的鼠IgM作为对照；CD176(TF)抗体处理后：在CD176(TF) 强阳性细胞株，大量肿瘤细胞凋亡；在CD176(TF)阳性细胞株，部分肿瘤细胞 凋亡；在CD176(TF)弱阳性或阴性细胞株，仅很少量肿瘤细胞凋亡；正常鼠IgM 处理后，仅很少量肿瘤细胞凋亡；

c.先用唾液酸酶(Neuraminidase from Vibrio cholerae)处理培养恶性肿 瘤细胞株，唾液酸酶浓度为每毫升5微单位，37℃下处理1小时，唾液酸酶处理 后，用CD176(TF)抗体，A78-G/A7孵育培养恶性肿瘤细胞株，抗体浓度分别为 每毫升1微克、每毫升5微克、每毫升10微克，孵育条件为37℃下处理5小时 或过夜；鼠浆细胞瘤来源的鼠IgM作为对照；孵育后分别用荧光素标记的 Annexin V或Nicoletti染色，流式细胞仪检测；CD176(TF)抗体处理后， 所有恶性肿瘤细胞系表现为大量肿瘤细胞凋亡；正常鼠IgM处理后，仅很少量肿 瘤细胞凋亡；

d.先用阿尔法2-3唾液酸酶(α2-3sialidase)处理培养恶性肿瘤细胞株， 阿尔法2-3唾液酸酶浓度为每毫升2微单位，37℃下处理90分钟；阿尔法2-3 唾液酸酶处理后，用CD176(TF)抗体孵育培养恶性肿瘤细胞株，抗体浓度分别 为每毫升1微克、每毫升5微克、每毫升10微克，孵育条件为37℃下处理5小 时或过夜；鼠浆细胞瘤来源的鼠IgM作为对照；孵育后分别用荧光素标记的 Annexin V或Nicoletti染色，流式细胞仪检测；CD176(TF)抗体处理后：在 CD176(TF)强阳性细胞株，大量肿瘤细胞凋亡；在CD176(TF)阳性细胞株， 部分肿瘤细胞凋亡；在CD176(TF)弱阳性或阴性细胞株，仅很少量肿瘤细胞凋 亡；正常鼠IgM处理后，仅很少量肿瘤细胞凋亡。

2、权利要求1所述的诱导恶性肿瘤细胞凋亡的方法的应用，其特征在于该 方法作为恶性肿瘤的生物治疗。