[发明专利]云南红药胶囊中毒性成分滇乌碱的质量控制方法

权利要求书

1、一种云南红药胶囊中毒性成分滇乌碱的质量控制方法，其特征在于由制黄草乌生药材的毒性控制、云南红药胶囊中滇乌碱含量控制、动物安全性试验控制制黄草乌生药材的毒性、高效液相色谱法检测毒性成分滇乌碱的含量四个步骤组成，按以下步骤进行：

(1)云南红药胶囊制黄草乌生药材的毒性控制

按小鼠每千克体重计，将制黄草乌生药材细粉的毒性剂量控制在≤2g/kg，按步骤(3)操作，小鼠不出现死亡为限量；当小鼠出现死亡时，则将黄草乌生药材按制黄草乌的常规方法进一步炮制，再通过步骤(3)操作，按小鼠每千克体重计，控制其制黄草乌生药材的毒性剂量≤2g/kg；

(2)云南红药胶囊中滇乌碱含量控制在每粒≤0.01mg，云南红药胶囊每粒重量为0.25g，当通过步骤(4)检测滇乌碱含量每粒>0.01mg时，则通过步骤(1)和步骤(4)检测控制滇乌碱含量每粒≤0.01mg；

(3)动物安全性试验控制制黄草乌生药材的毒性

①制黄草乌生药材的动物毒性试验供试药液的制备

将制黄草乌生药材粉碎过80目筛，用纯化水配制成混悬液，制黄草乌生药材细粉给药剂量按小鼠每千克体重计，其给药剂量为2g/kg；其药液浓度为0.1g/mL，小鼠给药体积为0.2mL/10g；

②取小鼠20只灌胃，给药体积为0.2mL/10g，将上述混悬液一次灌入小鼠胃中，连续观察3d，小鼠不出现死亡，表明云南红药胶囊中制黄草乌的炮制合格；

(4)高效液相色谱法检测毒性成分滇乌碱的含量

①供试品的制备：

取云南红药胶囊100粒，取胶囊中粉末置具塞锥形瓶中，加乙醚50ml及氨试液1mL，密塞，摇匀，放置过夜，滤过；药渣再加乙醚50mL，连续振摇1h，滤过，滤渣再用乙醚洗3-4次，每次20ml，滤过；合并滤液及洗液，60℃以下低温挥干乙醚；残渣加0.05mol/L硫酸液10ml使溶解，移入分液漏斗中，用硫酸液5ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用乙醚10ml振摇洗涤；酸液加氨试液调PH值至9，再用乙醚提取3次，每次10ml；合并醚液80℃以下低温蒸干；残渣加无水乙醇适量使溶解，移入10ml容量瓶中，用无水乙醇分次洗涤容器，洗液并入容量瓶内，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；

②对照品的制备：精密称取纯度>98.0％的滇乌碱，加无水乙醇制成0.5mg/mL的溶液，作为对照品溶液；

③色谱条件：色谱柱：U-bondapaKCN，7.8×300mm；流动相：甲醇-水-氨水，甲醇：水：氨水＝35：65：0.5；柱温：30℃；检测波长：260nm；流量：2mL/min；按滇乌碱峰面积计算，理论塔板数≥4100；

④测定方法：分别精密取对照品溶液和供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按外标法计算，即得。