[发明专利]一种甘蔗健康种苗高效繁育方法

权利要求书

1.一种甘蔗健康种苗高效繁育方法，其特征在于：通过种苗温水脱毒处理、种苗催芽、外植体剥离接种、诱导培养、病毒检测、增殖培养、生根培养、驯化练苗和室外假植九个步骤培育出甘蔗良种健康种苗，

所述的种苗温水脱毒处理步骤是将甘蔗的中部芽砍为10～12cm的单芽，置于水温52℃的恒温水浴锅中，进行30min的温水脱毒处理；

所述的种苗催芽步骤是将温水脱毒处理过的甘蔗芽，先用0.5％多菌灵浸泡5min，按5cm的间隔距离，依次摆放于底部有2～3cm厚粗沙的不锈钢托盘中，盖上2cm厚的粗沙，用MS培养基的无机成分溶液浇透，覆盖薄膜保水，然后置于温度35℃、光强为2000Lx的培养箱里，每天光照培养14h，进行催芽处理，处理过程中，间隔3天喷一次0.5％多菌灵杀菌，待蔗芽生长至15～18cm时，即可沿基部将芽取下备用；

所述的外植体剥离接种步骤是将蔗芽剥去外层老叶，用浓度75％的酒精棉球消毒后，直接剥离蔗芽茎尖生长点1～2mm接种；

所述的诱导培养是将茎尖接种培养于培养基成分为MS+0.5mg/L6-BA+3％Sugar+0.7％Agar+0.05％AC的培养瓶中，每一瓶接种一个茎尖，接种完成后，将接有外植体的培养瓶置于温度为28～32℃、光强为2000～2500Lx的培养室内进行诱导培养；

所述的病毒检测是将诱导培养获得的丛芽目测弃出变异苗，再以每瓶中的一个芽丛为单位，每丛取0.5g叶片，提取蔗叶汁，应用电镜或ELISA检测甘蔗花叶病；应用PCR技术检测宿根矮化病，PCR检测引物为单引物组合，Lxx1：ACCCTGTGTTGTTTTCAACG/Lxx2：CCGAAGTGAGCAGATTGACC或RSD33：CTGGCACCCTGTGTTGTTTTC/RSD297：TTCGGTTCTCATCTCAGCGTC，检测弃出病毒苗，获得可进行工厂化增殖扩繁的健康植株；

所述的增殖培养是将经过检测的健康植株，先转接于培养基为MS+1mg/L6-BA+3％Sugar+0.02％AC中，进行适应培养一代后，再转接至培养基MS+2mg/L6-BA+3％Sugar+0.02％AC中培养，随后的增殖继代交替使用这两个培养基配方，培养温度为28～32℃、光强为2000～2500Lx；15～20天继代一次，每代增殖达3～5倍；

所述的生根培养是将增殖培养到第7代的甘蔗丛芽，转接至生根培养基1/2MS+4.0mg/LNAA+2.5mg/LMET+2％Sugar+0.05％AC上，在培养温度为28～32℃、光强为2000～2500Lx条件下进行生根培养，培养20～25天，即可生根长成完整植株；

所述的驯化练苗是将长成完整的植株的瓶盖和培养室的窗户一起打开，驯化练苗2～3天，开瓶练苗时间在早晨或傍晚进行；

所述的室外假植是将驯化练苗后的甘蔗瓶苗，漂洗干净，浸泡于0.1％的高锰酸钾溶液40s，按照6cm×8cm的株行距种植于沙床上，浇透水，搭建拱棚，盖膜并加盖遮荫网保持温度在26～38℃、保持湿度在60～80％，假植期间每隔2天喷淋一次0.5％多菌灵，假植8～10天后，喷施0.1～0.2％的尿素；假植18～22天后，剪叶促壮；假植25天后，将丛芽苗分为单株进行二期假植。