[发明专利]用于净化水产养殖水体的微生物制剂及其制备方法

权利要求书

1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BJ菌株，其菌株保藏号为CGMCC NO.2288。

2.用于净化水产养殖水体的微生物制剂，其特征在于该制剂可按以下方法获得：以马铃薯蔗糖固体培养基为斜面培养基；以马铃薯蔗糖液体培养基为摇瓶菌种培养基；按重量淀粉1-3％，酵母膏0.5-1％，蛋白胨1-3％，牛肉膏0.5-1.5％，水补足至100％配制成种子罐发酵培养基；按重量麸皮80-90％，砻糠3-15％，葡萄糖2-5％，膨润土1-5％，K₂HPO₄ 1-3％，D生物素0.01-0.10％，加等量水后配制成固体培养基；以保藏编号为CGMCC No.2288的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BJ菌株为菌种，经各级发酵后制备而成。

3.一种制备权利要求2所述微生物制剂的方法，其特征在于按以下步骤进行：

(1)各级培养基的配制，其中：

a)斜面培养基：马铃薯蔗糖固体培养基，备用；

b)摇瓶菌种培养基：马铃薯蔗糖液体培养基，备用；

c)种子罐发酵培养基：按重量淀粉1-3％，酵母膏0.5-1％，蛋白胨1-3％，牛肉膏0.5-1.5％，水补足至100％；

d)固体培养基：麸皮：80-90％，砻糠：3-15％，葡萄糖2-5％，膨润土1-5％，K₂HPO₄ 1-3％，D生物素0.01-0.10％，加按料水比1∶1的水分；

(2)斜面菌种的培养：将保藏菌种：CGMCC No.2288枯草芽孢杆菌BJ菌株接种于步骤(1)斜面培养基上，在28-37℃的培养箱中培养18-24小时，取出后直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；

(3)摇瓶菌种扩增：在无菌操作下，取一环斜面菌种接入60ml步骤(1)摇瓶菌种培养基中，于28-37℃，110-220转/分的摇床中，培养18-24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；

(4)种子罐发酵：将步骤(1)种子罐发酵培养基放入种子罐中，在种子罐内温度121℃保持30分钟后，保压至0.02-0.18MPa之间，进行蒸汽高温灭菌后冷却至28-37℃；在火焰保护下迅速通过接种阀门向种子罐内接入步骤(3)摇瓶菌种，接种量为5-10％；开动搅拌机在转速110-220转/分，温度28-37℃，通气量4m³/h，罐压0.02-0.18MPa，pH自然，培养18-24小时，备用；

(5)批量产品的制备：将步骤(1)固体培养基灭菌并冷却；按制备菌剂重量2-3％的比例称取步骤(4)种子罐液体菌种，按菌种与水1∶5比例放入无菌水中活化1小时后接入固体培养基中、拌匀；移入培养间，关闭门窗，料厚1.5-2厘米，前期室温控制在28℃-30℃，待料温上升至40℃以上后，打开门窗、地上洒水或利用电风扇把料温控制在40℃至50℃，培养72小时后放入45℃-50℃的烘房中烘干、粉碎、装袋、封口后，即成用于净化水产养殖水体的微生物制剂。