[发明专利]一种促肝细胞生长素溶液制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种生化药品的制备工艺，特别是一种促肝细胞生长素溶液制备工艺。

背景技术

促肝细胞生长素pHGF是一种生化药品，主要用于治疗各种重症肝炎、慢性活动性肝炎和肝硬化等疾病，疗效确切、副作用小，已在临床应用10余年。促肝细胞生长素pHGF制备的主要原料是促肝细胞生长素溶液，促肝细胞生长素溶液是从新鲜的乳猪肝或小牛肝中提取的生物活性多肽溶液。现有技术促肝细胞生长素溶液制备工艺分两步，一是材料处理，二是促肝细胞生长素溶液制备。促肝细胞生长素溶液制备关键工艺，活性成分提取采用一种物理方法——反复冻融法，在肝脏清洗和肝组织破碎等材料处理后，将破碎的肝浆分装到容器中，放冷库冷冻，冻结后取出在恒温水浴摇床上振摇融化，再放冷库中冷冻，如此重复操作4～5次，进行活性成分提取。冻融结束后将匀浆液加热至75～100℃进行变性，再保温5～30分钟；保温结束后将提取液用冷却水冷却至常温，用离心机进行离心分离；取离心上清液，用10～50KD的超滤膜超滤；超滤液再用HCl或NaOH调节其pH值至6.0～7.0，最后，再用8～10KD的超滤膜超滤，即得促肝细胞生长素溶液。现有技术反复冻融法需要进行4～5次，存在操作麻烦、生产周期长，且收率低、成本高等缺陷。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的缺陷，提供一种操作方便、生产周期短、收率高、成本低，且产品质量符合国家标准要求的促肝细胞生长素溶液制备工艺。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：该促肝细胞生长素溶液制备工艺，包括材料处理、活性成分提取、加热变性、固液分离和pH值调整，其特点是：所述的活性成分提取采取酶或酸水解的化学提取法，所述的促肝细胞生长素溶液制备工艺包括以下步骤：

a、材料肝脏清洗步骤，用水把肝脏中的血水冲洗干净；

b、肝组织破碎步骤，将清洗干净的肝脏进行肝组织破碎；

c、活性成分提取步骤，在破碎的肝浆中加肝浆重量0.5～5倍的水，均匀搅拌成匀浆液，所述的酶水解提取法在匀浆液中加入肝浆重量0.05％～5％的酶进行酶水解，水解时间为0.5～10小时，所述的酸水解提取法用酸调节匀浆液的pH值至1.0～6.0之间后，放入温度为-5～-30℃的冷库中冻结5～40小时，冻结后取出在45℃以下水浴中解冻，再将解冻后的酸水解液用氢氧化钠调节pH值至6.0～7.0；

d、加热变性步骤，将酶或酸水解后的匀浆液加热至75～100℃，保温5～30分钟，使匀浆液中的大分子蛋白质变性沉淀；

e、固液分离和pH值调整步骤，将加热变性保温结束后的酶或酸水解液用冷却水冷却至常温，进行固液分离，分离后的清液用HCl/NaOH调整pH值至6.0～7.0，即得促肝细胞生长素溶液。

本发明促肝细胞生长素溶液制备工艺所述的“c、活性成分提取步骤”采用酶水解提取法加入的酶为木瓜蛋白酶或胰蛋白酶或胃蛋白酶或中性蛋白酶，酶的加入量为肝浆重量的2％，酶水解时间为8小时。

本发明促肝细胞生长素溶液制备工艺所述的“c、活性成分提取步骤”采用酸水解提取法加入的酸为盐酸或磷酸或醋酸，冷库的温度为-10±2℃，冻结时间为15±5小时。

本发明促肝细胞生长素溶液制备工艺所述的“b、肝组织破碎步骤”的肝组织破碎采用胶体磨匀浆破碎或超声波破碎。

本发明促肝细胞生长素溶液制备工艺所述的“e、固液分离和pH值调整步骤”分为两步：

e1、分离步骤，将加热变性保温结束后的酶或酸水解液用冷却水冷却至常温，用离心机进行离心固液分离；

e2、上清液超滤和pH值调整步骤，取离心分离后的上清液，用10～50KD的超滤膜超滤，将经过上述超滤的上清液用HCl/NaOH调整pH值至6.0～7.0，再用8～10KD的超滤膜进行超滤，超滤液即为促肝细胞生长素溶液。

本发明促肝细胞生长素溶液制备工艺所述的“c、活性成分提取步骤”中肝浆中水的加入量为肝浆重量的1倍，所述的“d、加热变性步骤”的加热温度为95±2℃，保温时间为15±5分钟，所述的“e2、上清液超滤和pH值调整步骤”中前后两次超滤分别使用50KD的超滤膜和10KD的超滤膜。