[发明专利]重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺

权利要求书

1. 一种重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，它包括：以嗜热菌中编码SOD的基因为模板，设计带有限制性酶切位点的特异引物扩增目的基因，经双酶切后连接于经相同酶切处理后的质粒载体pET28a中，构建重组质粒，命名为pSOD，然后经化学转化法将质粒pSOD转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)，经筛选，获得高产SOD的菌株，完成SOD工程菌的构建。

2. 根据权利要求1所述的重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，其特征在于所述的双酶切位点是EcoR I和Sal I。

3. 根据权利要求1所述的重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，其特征在于所述的克隆载体和表达载体用的是同一种质粒-pET28a；用BL21(DE3)作为表达菌株。

4. 一种重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，该发酵工艺至少包括：经过一级种子培养、二级种子培养、上罐发酵、诱导表达四个步骤，最终获得发酵产物-SOD，且该发酵工艺可以实现SOD的高效表达，使目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的60％以上。

5. 根据权利要求4所述的重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺，其特征在于发酵基本培养基按照如下表5进行配制；发酵用补料培养基按照如下表6进行配制，补料间隔为4-5h。

表5高密度发酵基本培养基

  营养  终浓度  胰蛋白胨  10g/L  酵母提取物  10g/L  NaCl  10g/L  葡萄糖  20g/L  K₂HPO₄  2g/L  MgSO4·7H2O  0.25g/L  (NH4)₂SO4  5g/L  Kana  50mg/L

表6高密度发酵补料培养基

 成份  补料量  补料频率 葡萄糖  80g  5h (NH4)₂SO4  20g  5h K₂HPO₄  8g  5h

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