[发明专利]一种真菌基因替换载体及基于该载体的基因替换体系

权利要求书

1.一种真菌基因替换载体，其特征在于，所述的真菌基因替换载体包括β-葡萄糖醛酸酶表达元件和目标基因替换元件。

2.如权利要求1所述的真菌基因替换载体，其特征在于，所述的β-葡萄糖醛酸酶表达元件包括β-葡萄糖醛酸酶基因和真菌启动子。

3.如权利要求2所述的真菌基因替换载体，其特征在于，所述的真菌启动子包括构巢曲霉甘油醛3磷酸脱氢酶基因或构巢曲霉色氨酸合成基因或稻瘟病菌疏水蛋白1基因。

4.如权利要求1所述的真菌基因替换载体，其特征在于，所述的目标基因替换元件包括抗性基因以及与该目标基因上下游同源的序列。

5.如权利要求4所述的真菌基因替换载体，其特征在于，所述的抗性基因包括潮霉素抗性基因或草胺膦抗性基因基因或新霉素磷酸转移酶基因。

6.如权利要求1或2或3或4或5所述的真菌基因替换载体，其特征在于，所述的真菌包括稻瘟病菌，所述的β-葡萄糖醛酸酶基因具有序列表中SEQ IDNo.1所述的核苷酸序列。

7.一种真菌基因替换载体的构建方法，其特征在于，将β-葡萄糖醛酸酶真菌表达元件连接到第一载体中，将基因替换元件连接到该第一载体中，获得含有β-葡萄糖醛酸酶基因的真菌基因替换载体。

8.如权利要求7所述的真菌基因替换载体的构建方法，其特征在于，所述的β-葡萄糖醛酸酶真菌表达元件包括β-葡萄糖醛酸酶基因和真菌启动子。

9.如权利要求8所述的真菌基因替换载体的构建方法，其特征在于，所述的真菌启动子包括构巢曲霉甘油醛3磷酸脱氢酶基因或构巢曲霉色氨酸合成基因或稻瘟病菌疏水蛋白1基因。

10.如权利要求7所述的真菌基因替换载体的构建方法，其特征在于，所述的基因替换元件包括抗性基因以及与基因上下游序列同源的序列。

11.如权利要求10所述的真菌基因替换载体的构建方法，其特征在于，所述的抗性基因包括潮霉素抗性基因或草胺膦抗性基因基因或新霉素磷酸转移酶基因。

12.如权利要求7所述的真菌基因替换载体的构建方法，其特征在于，所述的第一载体包括双元载体，所述的β-葡萄糖醛酸酶基因具有序列表中SEQ IDNo.1所述的核苷酸序列。

13.一种基因替换体系，其特征在于，包括：构建包含基因替换元件和β-葡萄糖醛酸酶表达元件的真菌基因替换载体；将构建好的该真菌基因替换载体导入该真菌进行基因替换获得转化子；所得该转化子的β-葡萄糖醛酸酶活性检测；目标基因替换突变体的验证。

14.如权利要求13所述的基因替换体系，其特征在于，所述的真菌基因替换载体通过农杆菌介导的转化导入该真菌菌株进行基因替换。

15.如权利要求13所述的基因替换体系，其特征在于，所述的基因替换突变体的验证包括以下步骤：针对目标基因及替换载体的不同部分设计引物；以该引物进行聚合酶链式反应；对该聚合酶链式反应结果进行分析；根据分析结果确定突变体。