[发明专利]重组金黄色葡萄球菌肠毒素I口服制剂及应用

权利要求书

1.一种重组金黄色葡萄球菌肠毒素I口服制剂，所述重组金黄色葡萄球菌肠毒素I属于超抗原蛋白，其特征是：SEQ ID NO.1是该重组金黄色葡萄球菌肠毒素I的氨基酸序列，表达该重组金黄色葡萄球菌肠毒素I的是重组质粒pGEX-4T-1-SEI，该质粒由pGEX-4T-1和SEQ ID NO.2的核苷酸序列经过重组构建而成，该口服制剂还含有制剂允许的药物赋形剂或载体。

2.根据权利要求1所述的重组金黄色葡萄球菌肠毒素I口服制剂，其特征是所述重组金黄色葡萄球菌肠毒素I通过以下步骤获得：

(1)设计分别带有BamH I和Xho I酶切位点的用于克隆金黄色葡萄球菌肠毒素I成熟肽序列的上下游引物：

SEQ ID NO.3：gta gga tcc caa ccc gat cct aaa tta gac，划线部分为BamH I酶切位点，

SEQ ID NO.4：gga ctc gag tca gtg agt att aag aaa tac，划线部分为Xho I酶切位点；

(2)以金黄色葡萄球菌基因组为模板，采用PCR扩增获得编码金葡菌肠毒素I蛋白成熟肽的基因片段，将其连入pGEM-T质粒载体上的多克隆位点，构建pGEM-T-SEI重组质粒，通过测序证实具有SEQ ID NO.2的序列的基因片段与GenBank数据库中的编码相同蛋白质的基因序列完全一致；

(3)以pGEM-T-SEI质粒为模板，PCR扩增获得两端带有酶切位点的编码金葡菌肠毒素I蛋白成熟肽的基因序列，将上述基因片段用内切酶BamH I和Xho I进行酶切后与用相同内切酶处理后的pGEX-4T-1质粒相连接，构建表达质粒pGEX-4T-1-SEI；

(4)将pGEX-4T-1-SEI表达质粒转化至大肠杆菌BL21，诱导表达带GST标签的重组GST-SEI融合蛋白，收获菌体并破碎后离心收集上清，依次采用亲和层析、离子层析、凝胶层析获得重组金葡菌肠毒素I。

3.根据权利要求1所述的重组金黄色葡萄球菌肠毒素I口服制剂，其特征是：所述药物的给药方式选用口服给药、胃肠道给药或非胃肠道外给药。

4.根据权利要求1所述的重组金黄色葡萄球菌肠毒素I口服制剂，其特征是：该口服制剂含有的药物赋形剂或载体包括防止或抑制肠糜蛋白酶蛋白水解活性的成分、防止或抑制肠胰蛋白酶蛋白水解活性的成分、防止或抑制胃蛋白酶蛋白水解活性的成分、吸收促进剂和生物制品中可接受的组分和辅料。

5.根据权利要求1所述的重组金黄色葡萄球菌肠毒素I口服制剂在制备治疗恶性肿瘤以及其他严重并发症药物中的应用。