[发明专利]用于检测指状青霉菌对抑霉唑抗性频率的引物序列及其检测方法

权利要求书

1.一种用于检测指状青霉菌对抑霉唑抗性频率的引物序列，其特征在于：包括三组引物，第一组引物的正向引物具有序列表中SEQ ID NO.1所述的碱基序列，第一组引物的反向引物具有序列表中SEQ ID NO.2所述的碱基序列；第二组引物的正向引物具有序列表中SEQ ID NO.3所述的碱基序列，第二组引物的反向引物具有序列表中SEQ ID NO.4所述的碱基序列；第三组引物的正向引物具有序列表中SEQ ID NO.5所述的碱基序列，第三组引物的反向引物具有序列表中SEQ ID NO.4所述的碱基序列。

2.一种指状青霉菌对抑霉唑抗性频率的检测方法，包括以下步骤：

(1)提取指状青霉菌对抑霉唑的敏感菌株、抗性类型I菌株、抗性类型II菌株以及被测菌的DNA；

(2)将敏感菌株、抗性类型I菌株和抗性类型II菌株的DNA稀释制成若干个浓度梯度，分别加入第一组引物、第二组引物和第三组引物，进行real-time PCR扩增，得到分别用于检测指状青霉菌总DNA量、抗性类型I菌株DNA量和抗性类型II菌株DNA量的标准曲线；

(3)取等量的3组被测菌DNA，分别加入第一组引物、第二组引物和第三组引物，同时进行三组real-time PCR扩增，分别根据用于检测指状青霉菌总DNA量、抗性类型I菌株DNA量和抗性类型II菌株DNA量的标准曲线，得到被测菌中指状青霉菌总DNA量Q_T、抗性类型I菌株DNA量Q_R-I和抗性类型II菌株DNA量Q_R-II；

(4)计算样品中指状青霉菌对抑霉唑抗性频率F_R(DNA)＝(Q_R-I+Q_R-II)/Q_T。