[发明专利]一种鸡A－FABP抗血清制备及其在特异性鉴定中的应用方法无效
| 申请号： | 200810063846.4 | 申请日： | 2008-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN101241129A | 公开（公告）日： | 2008-08-13 |
| 发明（设计）人： | 李辉;石慧;王启贵 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531;G01N33/53 |
| 代理公司： | 哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司 | 代理人： | 刘娅 |
| 地址： | 150030黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 fabp 血清 制备 及其 特异性 鉴定 中的 应用 方法 | ||
1、一种鸡A-FABP抗血清制备方法，其特征是：
(1)根据鸡A-FABP基因序列扩增其编码区序列，并将该序列分别构建到原核表达质粒pGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3中，得到鸡A-FABP基因的原核表达质粒pGEX-4T-1/A-FABP和真核表达质粒pcDNA3/A-FABP；
(2)将原核表达质粒pGEX-4T-1/A-FABP转入到大肠杆菌感受态细胞BL21DE中，利用IPTG诱导其表达鸡A-FABP融合蛋白，融合蛋白经纯化后免疫家兔制备抗血清。
2、根据权利要求1所述的制备方法得到的鸡A-FABP抗血清在特异性鉴定中的应用方法，其特征是：
(1)将构建的真核表达质粒pcDNA3/A-FABP通过水动力转染法注入小鼠体内，使该真核表达质粒在小鼠肝脏中表达，然后提取小鼠肝脏蛋白与上述制备的抗血清进行抗体特异性分析；
(2)分别取鸡的心脏、肝脏、腹脂、肌肉、肌胃、脾、小肠、肺和肾9种组织，利用上述制备的抗血清进行抗体特异性分析。
3、根据权利要求2所述的一种鸡A-FABP抗血清在特异性鉴定中的应用方法，其特征是：所述的水动力转染法是通过小鼠尾静脉快速注射真核表达质粒pcDNA3/A-FABP的方式实现的，即利用5mL医用注射器向每只小鼠尾静脉中注射体积为小鼠体重10％的重组质粒pcDNA3/A-FABP溶液，重组质粒pcDNA3/A-FABP为10ug，注射持续时间为5-8s。
4、根据权利要求2所述的一种鸡A-FABP抗血清在特异性鉴定中的应用方法，其特征是：所述的抗体特异性分析方法是通过Western blot方法实现的。
5、根据权利要求4所述的一种鸡A-FABP抗血清在特异性鉴定中的应用方法，其特征是：所述的Western blot方法为：提取鸡的9种组织样蛋白并定量，按每种组织100μg上样，60V稳压至蛋白跑过浓缩胶后，将电压调至80V稳压，电转移的条件是200mA稳流40min。
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