[发明专利]软枣猕猴桃组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及到东北地区的一种浆果的无性繁殖方法，即软枣猕猴桃的组织培养法。本发明属于植物组织培养技术和森林培育领域。

背景技术

软枣猕猴桃果实是一种珍稀的、天然的、绿色的可食用浆果，因其潜在的营养价值和商用价值，是一种世界珍稀的、纯天然的、绿色的可食用浆果，是极具有开发前景的第三代水果之一。然而由于无计划掠夺式的采摘，致使软枣猕猴桃资源遭到严重破坏，自然修复能力降低，蕴藏量和可采量锐减，供需矛盾日益加剧。

我国软枣猕猴桃的育苗技术主要是无性繁殖(即分株、压条、硬枝扦插、绿枝扦插)等技术，利用组培技术繁育软枣猕猴桃的资料极少。查阅大量相关资料发现，只有刘瑞林曾于2001年发表过组织培养方面的简报。但软枣猕猴桃组织培养体系尚未建立，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了软枣猕猴桃深加工业的发展。2007年我所对软枣猕猴桃组织培养体系进行了系统地研究。

发明内容

本发明对软枣猕猴桃采用组织培养技术，以休眠枝条水培后萌发的嫩枝为外植体，经外植体灭菌、嫩芽接种、分化增殖培养基筛选、生根培养基筛选等步骤，研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木生长分化的调控，解决软枣猕猴桃的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完善的软枣猕猴桃组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。

附图说明

图1软枣猕猴桃水培嫩芽接种10天的长势情况，叶片展开，叶色浓绿

图2a部分处理继代增殖培养25天分化的试管苗数  b不同处理继代增殖培养25天试管苗苗高

图3a软枣猕猴桃四种生根处理培养30天，只有处理1未见生根，其余3个处理均已生根，其中处理4的生根状况为最好，生根率达87.0％。

具体实施方式

以软枣猕猴桃休眠枝条经水培后萌发的嫩枝为外植体，具体由以下四个步骤组成：

(1)外植体灭菌首先采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后用0.1％升汞灭菌5分钟，以无菌水浸泡40分钟；

(2)接种在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、1mg/L的赤霉素(GA₃)，PH 5.8，培育基础苗。培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，待培养20天后，苗高约3～4cm，即开始下一个阶段；

(3)继代增殖将基础苗转移到继代增殖培养基上进行增殖培养。以MS+6-BA(0.5mg/L、1mg/L)+ZT(0.5mg/L、1mg/L)或IAA(0.5mg/L、1mg/L)8种培养基进行筛选，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，培养30天。结果最佳增殖培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、1mg/L的玉米素(ZT)；培养25天，增殖倍数达4.0；

(4)生根剪取增殖培养中长度为1.5～2.0cm的健壮苗接种到四种生根培养基上，采用单因素试验设计进行生根培养筛选。培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux。结果在MS培养基中添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)的培养基生根效果最好，在培养30天生根率达87.0％。