[发明专利]人源化抗CD25单链抗体及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，尤其涉及一种单链抗体。

本发明还涉及表达该单链抗体的表达载体和宿主细胞。

本发明还涉及该单链抗体的制备方法。

背景技术

CD25是IL-2受体的α亚基，在静息T细胞上不表达或只有很低水平的表达， 在活化后的T细胞上高表达，成为活化T细胞的标志之一，因此又称作Tac抗原 (T细胞活化抗原)[Robb RJ，Kutny RM.Structure-function relationships for the IL-2 receptor system.J Immunol 1987；139：855-62]。抗CD25抗体可以通过封闭 CD25，阻断IL-2的信号传递，抑制T细胞活化，例如抗CD25单抗anti-Tac可显 著降低移植排斥发生率[Kirkman RL，Saqiro ME.Carpcer CB.Transplantation. 1991；51：107～13]。此外，CD25在一些恶性血液疾病细胞上组成型高表达， 包括皮肤T淋巴细胞瘤、毛细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、霍奇金病、 成人T细胞性白血病等。在许多自身免疫性疾病中，CD25在T细胞上也过量表 达。因此，抗CD25抗体及免疫毒素对这些肿瘤及自身免疫性疾病也可能提供 有效治疗[Waldmann TA.Daclizumab(anti-Tac，Zenapax)in the treatment of leukemia/lymphoma.Oncogene.2007，26，3699-3703]。

最早用于制备单抗的方法为杂交瘤法，所获抗体为鼠源性，但临床研究发 现其鼠源性会诱导产生中和抗体(人抗鼠抗体，HAMA)[LoBuglio AF，Wheeler RH，Trang J，Haynes A，Rogers K，Harvey EB，et al.Mouse/human chimeric monoclonal antibodies in man：kinetics and immune response.Proc Natl Acad Sci USA 1989；86：4220-4.]。为克服这一缺点，人们对anti-Tac进行了人源化改造。 1997年，美国罗氏公司生产的人源化抗CD25单克隆抗体daclizumab成为第一个 被FDA批准上市的人源化抗体，用于防治移植排斥[Tsurushita N，Hinton PR， Kumar S.Design of humanized antibodies From anti-Tac to Zenapax.Methods. 2005；36：69-83]。

Daclizumab由90％的人源抗体序列和10％的鼠源抗体序列构成，人源序列 源自人IgG1恒定区和Eu骨髓瘤抗体的可变框架区，鼠源序列源自鼠抗-Tac抗 体的互补决定区，从DNA序列估计其分子量为144kDa。人源化改造后的抗体 具备了以下优点：引起HAMA的几率低，在血浆中的半衰期由鼠源抗体的40 小时延长到20天，而且通过其人源的Fc段可介导抗体依赖的细胞毒(ADCC) 反应[Morris JC，Waldmann TA.Advances in interleukin 2 receptor targeted treatment.Ann Rheum Dis.2000，59(suppl I)：i109-i114]。

单链抗体(single chain fragment variable antibody，scFv)是一种基因工程 抗体，通过DNA重组技术将抗体轻链可变区(V_L)和重链可变区(V_H)通过 一段连接短肽(linker)首尾连接而成，是保留完整抗原结合部位的最小功能 片段。和完整抗体相比，单链抗体具有以下优点：1)分子量小，大小仅为完 整抗体的六分之一，免疫原性较低；2)组织穿透力强，容易进入实体瘤周围 的微循环；3)血液清除快，肾脏蓄积很少；4)无Fc段，非特异结合低；5) 易于通过基因工程大量生产；6)易于基因操作，更易构建重组免疫毒素。

在国内外研究中，已有基于鼠源性抗CD25单抗的scFv构建和生产报道， 但因鼠单抗可变区的存在，应用时仍可能会有HAMA产生。目前，尚没有相关 文献涉及用人源化抗CD25抗体daclizumab构建的scFv。