[发明专利]一种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法

权利要求书

1、一种从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA的方法，其特征是依次包括如下步骤：

1)吸水材料制备：将硬质吸水海绵裁成3mm×3mm×10mm，下端为楔型的条状物，并事先经过消毒灭菌；

2)样品吸出：电泳后，在紫外灯照射下将制成楔型的强吸水材料条对准目的DNA条带插入凝胶中，待其吸收15～30秒后，可见发出荧光的DNA条带被吸入其中，然后拔除；

3)离心收集：将此吸水材料放入带有漏斗的离心管中，以15000rpm速度离心3～4分钟，即可将DNA溶液从中离心脱出来；

完成这3步所制得的DNA样品就可用作PCR模板、酶切、分子克隆等实验操作，若需进一步去除杂质，可将回收DNA溶液采用如下纯化操作步骤：

4)DNA吸附：将DNA回收柱放置在离心管中，将离心收集溶液移入回收柱纯化膜上，室温下放置2分钟，以10000～12000rpm速度离心1分钟，弃离心管底部液体；

5)DNA洗涤：在DNA回收柱中加入成份为10～20mmol/L pH8.0的三羟甲基氨基甲烷与无水乙醇为1∶2至1∶4混合的DNA洗涤液500～800μl，以10000～12000rpm，离心1分钟，弃离心管底部液体，重复操作1次，将DNA硅胶吸附柱重新放入离心管中，以10000～12000rpm速度离心2分钟；

6)DNA洗脱：将DNA回收柱移入一只新1.5ml离心管中，向DNA回收柱纯化膜中央加入30～40μl预热至37℃的TE溶液或用去离子水洗脱，在室温下放置2分钟，然后12000rpm离心2分钟，离心管底的液体即为琼脂糖凝胶中回收的DNA溶液，可直接用于后续实验，也可-20℃保存备用。

2、根据权利要求1所述的一种从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA的方法，其特征是采用硬质吸水海绵用于从琼脂糖凝胶中快速吸收出DNA样品，带漏斗的离心管利于高吸水材料吸收样品被离心至底部，硬质吸水海绵和带漏斗的离心管均可为商业购得，DNA洗涤液用于冲洗掉DNA以外的杂质成分，在含有约70％的乙醇时，洗涤过程中DNA不会溶解丢失，TE溶液是三羟甲基氨基甲烷与EDTA的溶液，或是用去离子水洗脱DNA。