[发明专利]有毒有害物急性毒性藻红外测试方法

说明书

技术领域

本发明涉及对有机毒物、重金属、农药急性毒性的测试方法，具体涉及一种用敏感藻测试有毒有害物急性毒性的方法。属于环境保护和食品安全监测等技术领域。

应用范围：本方法适用于有机毒物、重金属、农药；电镀废水，生产甲醛的废水，炼焦废水，污染土壤农，污染饮用源水，污水厂污泥，污水厂出水等；福尔马林泡发的毛肚、猪蹄筋、牛蹄筋、鸭肠、干鱿鱼、干海参、干墨鱼等；施过农药的西红柿、黄瓜、花菜、大白菜、莲花白、豇豆、新疆萄萄、草莓、樱桃等急性毒性检测。

背景技术

现有技术中，对电镀废水，生产甲醛的废水，炼焦废水，污染的土壤，污染饮用源水，污水厂污泥，污水厂出水等；福尔马林泡发的毛肚、猪蹄筋、牛蹄筋、鸭肠、干鱿鱼、干海参、干墨鱼等；施过农药的西红柿、黄瓜、花菜、大白菜、莲花白、豇豆、新疆萄萄、草莓、樱桃等物质含有的有机毒物、重金属、农药的急性毒性检测，目前普遍采用发光细菌法进行检测，其测试步骤是：a冰箱中取出发光细菌冻干粉称取1g放入100ml蒸馏水中配成发光细菌液，并复苏2～4小时；b将复苏后的发光细菌液放入培养箱中在25℃进行恢复活力培养8小时取出；c在4个测试皿中分别加入5ml经恢复活力培养的发光细菌液，其中2个测试皿加0.05ml测试样品，另外2个测试皿加0.05ml蒸馏水；d将处理好的4个测试皿放入荧光分析仪中，在20～25℃室温下测试发光细菌的荧光变化强度，每1min测一次，直到荧光不在变化止；e用两测试组荧光强度变化大小比较来确定测试样品毒性大小。发光细菌法的特点是：测试灵敏度高，达到0.01～50mg·L-1，测试时间快，平均为5min；不足之处是不同发光细菌的发光本质不同，检测时操作较繁琐，测试仪器较重需要交流电源，发光细菌价格贵等。由此可知，发光细菌法存在重现性差、操作不便、不能现场测试、测试成本高等不足。

自然水体中的藻类具有采样、分离、培养和保存容易等特点，因而在有关行业中应用越来越广泛。根据不同藻类的特点，其用途各有不同。但是，目前有关运用操作简便、测试迅速、仪器价廉携带方便、藻类取材容易成本低的藻类红外辐射测试有毒有害物急性毒性尚未见国内外报道。不同藻种对有毒有害物急性毒性的藻红外响应不同，只有对急性毒性具有特殊的藻红外辐射响应的敏感藻可作为藻红外测试技术中的测试藻。敏感藻是指对有毒有害毒物急性毒性的藻红外辐射响应具有显著性、灵敏性和专一性的藻类，显著性指对急性毒性的响应温差大、响应时间快，灵敏性指对有毒有害物的响应剂量小，专一性指对某类有毒有害毒物急性毒性的良好响应。但是，目前国内外尚未有关于自然水体藻测试有毒有害物急性毒性的报道，也无用红外测温仪测试微生物红外辐射的报道。因此，经检索未发现与本方法研究有关的最接近的对比文献。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种操作方便、可现场测试、测试成本较低的用敏感藻测试有毒有害物急性毒性的方法。

敏感藻的准备：以羊角月牙藻(Selenastrum capricornutum)作为有机毒物的敏感藻，短线脆杆藻(Fragilaria brevistriata)作为重金属的敏感藻，水华鱼腥藻(Anabaenaflos-aquae)作为农药的敏感藻；

对上述敏感藻的叶绿素a含量进行测定：分别测定上述敏感藻的叶绿素a含量≥4.0mg·L^-1时，培养藻液可用于毒性测试，即以叶绿素a含量≥4.0mg·L^-1作为测试藻量标准；

测试仪器准备：便携式红外测温仪；分辨率≤0.1℃；

测试样品的处理：取待测样品稀释，配制成×5、×10、×10²、×10³的稀释液待用；

毒性测试：根据待测样品的不同，选择准备相应的敏感藻，在试验组的三个容器中分别加入5ml所述藻液，待藻液温度稳定时用红外测温仪对准藻液面中心测试并记录所测温度一次，然后用移液管取出待测样品的稀释液0.05ml加入上述藻液中，以后每1.5min测温一次，直到温度变化停止测温记录；如果藻液未响应则依次增加0.5ml稀释液进行测试直到产生响应；同时，在对照组的三个容器中分别加入5ml所述藻液，在藻液中加入0.05ml蒸馏水，立即用前面的测试方法对两组藻液进行测温记录，测试顺序从毒物的低浓度向高浓度逐一进行；试验组重复三次，对照组重复三次；测试顺序从毒物的低浓度向高浓度逐一进行；当确定第一次响应浓度后，再将该浓度样品液按×10²、×10或×5进行稀释测试，测试顺序从高向低稀释倍数逐一进行；