[发明专利]肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A1亚单位活性片段Stx2a1重组蛋白及表达方法与应用

权利要求书

1.一种肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白，其特征在于包括

1)肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁蛋白和表达载体片段；

或

2)肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁蛋白羧基端经一个或几个氨基端缺失或添加获得的与Stx2a₁蛋白具有相似功能的蛋白和表达载体片段。

2.根据权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白，其特征在于所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白，其特征在于所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁蛋白的编码核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白的表达方法，其特征在于将截短去掉肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位羧基端1～20个氨基酸后对应的核苷酸序列片段与表达载体连接，然后转化宿主菌进行表达。

5.根据权利要求4所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白表达方法，其特征在于在于将截短去掉肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位羧基端15个氨基酸后对应的核苷酸序列片段与表达载体连接，然后转化宿主菌进行表达。

6.根据权利要求4所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白表达方法，其特征在于包含以下步骤：

1)通过生物信息学软件分析肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位，截短去掉其羧基端1～20个氨基酸后，根据截短后的氨基酸序列对应的核苷酸序列片段设计引物；

2)以步骤1)设计的引物、通过PCR扩增肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁蛋白基因；

3)将所述出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁蛋白基因克隆至表达载体，然后转化至宿主菌；

4)诱导表达Stx2a₁蛋白；

5)纯化步骤4)得到的Stx2a₁蛋白；

6)纯化后的Stx2a₁蛋白的免疫原性的检测。

7.根据权利要求4所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白表达方法，其特征在于步骤1)中设计得到的引物为SEQ ID NO：4-5。

8.根据权利要求4所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白表达方法，其特征在于步骤2)中的PCR模板为专产志贺毒素2的菌株99A021。

9.根据权利要求4所述的肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺毒素2A₁亚单位活性片段Stx2a₁重组蛋白表达方法，其特征在于步骤3)中所述的表达载体为pET-22b，宿主菌为BL21。